Wako PURE system采用世界首创的再构成系无细胞蛋白质合成技术, 对于复制、翻译及能量再生所需要的约30种因子进行调制、精制后,再加以重新构成。其中包括大肠菌的翻译因子--开始因子(IF1、IF2及IF3)、伸长因长(EF-G、EF-Tu及EF-Ts)、终结因子(RF1、RF2及RF3)、脂质体循环因子、与20种氨基酸相对应的氨基酰tRNA合成酶、甲硫氨酸酰胺tRNA转移酶、T7 RNA聚合酶等。此外, 还包括脂质体、氨基酸、tRNA、能量源及能量再生系统。

对于上述构成因子(脂质体蛋白质除外),均添加了组氨酸标签。通过使用金属新和树脂,使反应所需的因子与目标蛋白质之外的构成因子相结合,再通过限外过滤即可除去树脂结合因子与脂质体蛋白质。采用这种方法,可以在短时间内得到高纯度、无标签的目标蛋白质。

【特点】

● 通过逆反应用标签系统,使蛋白质的精制变得更容易。
● 使天然序列蛋白质的精制更容易。
● 由于是重组系,因此不含有杂质蛋白质。
● 从合成到精制结束只需要三个小时。
● RNase污染极少。

【扩大反应规模】

采用WakoPURE system,可以根据需要扩大反应规模。单个产品为50μl。如使用多个产品,则可以实现蛋白质的大量合成。增加反应液并不会影响合成效率。

使用试剂盒中的二氢叶酸还原酶(DHFR)对照剂,在37°C条件下进行DHFR合成反应一小时后,对每一道使用5μl。然后进行SDS-PAGE,最后用SYPRO RED进行染色。

【Q&A】

Q: 所用的模板需要什么条件?

A: WakoPURE system可用于PCR产物或者质粒。但是,模板需要具备下列序列(亦可以是RNA)。

·开始密码子:(ATG)

·终止密码子:(TAG、TGA或TAA三者之一)

·在基因上流应有T7操纵子序列

·在开始密码子的上流约10个碱基处应有脂质体结合部位(SD序列)

·在终止密码子的下流应有6个碱基以上的序列(适用于PCR产物)

·在终止密码子的下流应有复制终止子序列(适用于质粒DNA)

Q: 蛋白质合成量有多少?
A: 获取量上限为100μg/ml。平均合成量为20~50μg。

编号	品名	容量
299-59501	WakoPURE System （体外蛋白质合成试剂盒）	4次用
295-59503		16次用

<四次用试剂盒>

A溶液 .................................. 25μl×4支

B溶液 .................................. 10μl×4支

DHFR对照剂 ............................ 5μl×1支

通用启发剂 .............................. 80μl×1支

 

<十六次用试剂盒>

A溶液 .................................. 25μl×16支

B溶液 .................................. 10μl×16支

DHFR对照剂 ..........................5μl×1支

通用启发剂 .............................80μl×1支

在蛋白质组分析中,经常会使用质谱仪来进行蛋白质的鉴定及翻译后的修饰。根据电离方法及分析仪的不同组合,质谱仪可以分为多种类型。在测定肽的质谱时,通常 会采用MALDI法(Matrix-assisted Laser Desorption Ionization,即基质辅助激光解附电离法)及ESI法(Electrospray Ionization,即电喷雾电离质谱法)。MALDI法的长处在于可以在短时间内对于多种样品进行处理,而在使用串联质谱仪获取肽的序列信息时,则可 以采用ESI法。MLADI法是将样本添加在一种被称为基质(matrix)的化合物上,制成混合结晶,然后再用激光照射其表面以实现离子化。用作基质的 化合物可以是α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-Cyano-4-hydroxycinnamic Acid)、芥子酸(Sinapic Acid,SA)或者2,5-二羟基苯甲酸(2,5-Dihydroxybenzoic Acid, DHB)。根据样本的不同,可选用不同的基质。一般说来,CHCA适用于肽类样品,SA适用于蛋白质样品,而DHB则适用于肽、糖类及糖脂类样品。但是, 对于市面上出售的基质产品,如果不进行任何处理而加以使用,则在质谱分析数据上会出现来源于基质的峰值,本底较高,信噪比较小。因此,对于这些基质,在使用前应进行再结晶处理,以尽可能除去源自基质的峰质。

本品为一种经过再结晶处理的高纯度基质。使用时无须进行再结晶处理即可得到清晰的质谱。

编号	品名	用途	容量
037-19261	α-氰基-4-羟基肉桂酸 [CHCA]	蛋白质组分析用	50mg×5支
192-13361	芥子酸 [SA]	蛋白质组分析用	50mg×5支
044-29101	2,5-二羟基苯甲酸 [DHB]	蛋白质组分析用	50mg×5支

编号	品名	用途	容量
125-05061	赖氨酰肽链内切酶，质谱分析级	蛋白质组分析用	20μg×5支
202-15951	猪胰岛素，质谱分析级	蛋白质组分析用	20μg×5支
293-57701	阴性胶片染色剂质谱分析套装	电泳分析用	20次
299-58901	银染试剂质谱分析套装	电泳分析用	20次

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