当底物发生化学反应而产生的能量以光的形式释放出来的时候，我们称这个过程为化学发光。鲁米诺（luminol）是常用的化学发光试剂之一，被过氧化物氧化后它会产生一种激发态的产物--aminophthalate。这种产物衰变至低能态的同时释放出光子。专利添加物可以提高鲁米诺反应的发光强度和持续时间（稳定性），从而使增强型化学发光（ECL）成为可能。
  化学发光成为大多数蛋白实验室的检测方法，其这些优点如下：1、使用化学发光可以通过多次曝光获得好的成像结果；2、可以将检测试剂去除，再对其他目的蛋白进行检测并成像，或对检测条件进行优化；3、具有很宽的线性响应范围，从而可以检测并定量很宽浓度范围的蛋白质；4、化学发光在所有的检测方法中具有高灵敏度。
  在化学发光分析中，如果再加入适当的增强剂，则灵敏度提高且发光时间延长，可改善测定的重现性。实验证明，对位酚类衍生物的发光增强作用明显，其发光效率可上升几十倍，发光时间也获得有效延长。
  吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物应用于化学发光免疫分析（CLIA），通常采用的体系是Acridinium ester/ H₂O₂系统。即用吖啶酯或吖啶磺酰胺标记抗体或抗原，用HNO₃+H₂O₂和NaOH作发光启动试剂。有些在发光启动试剂中加入Triton X-100，CTAC，Tween-20等表面活性剂以增强发光。
  自然中广泛分布着生物发光有机体，其中包括细菌、真菌、鱼、昆虫等。在这些生物发光有机体中催化生物发光反应的各种酶都称之为荧光素酶（Luciferases），底物则命名为荧光素（Luciferin）。D-荧光素（D-luciferin)是生物冷光检查使用广泛的物质，是荧光素检测试剂盒的核心成份，广泛应用于生物、医药、食品、卫生、环境等领域。D-荧光素、D-荧光素钾盐、D-荧光素钠盐，作为Luciferase的作用底物，常用于以下实验：
 1．报告基因分析
 2．动物活体成像(In vivo imaging) 和细胞体外分析（In vitro imaging）
 3．三磷酸腺苷（ATP）测定
 4．其它 luciferase 及其基因相关的分析和研究工作
  荧光素类和罗丹明类是生物技术中常用的标记染料，广泛应用于蛋白质和核酸的检测分析中，人们对其结构和性能已经有了深入的了解。菁染料是一种比较特殊的染料，利用它摩尔消光系数高、光谱范围广且光量子产率高等特性，应用于生物大分子荧光标记。菁染料主要用于标记核酸。菁染料是一种比较特殊的染料，利用它摩尔消光系数高、光谱范围广且光量子产率高等特性，应用于生物大分子荧光标记。菁染料主要用于标记核酸。
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