ISOGEN II 总RNA及小RNA提取试剂
ISOGEN II总RNA及小RNA提取试剂
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离心后的沉淀
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ISOGEN II 100 mL
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ISOGEN II 是从动物组织和培养细胞中提取总RNA和小RNA的试剂。本品是含有苯酚和胍的均匀液体，根据与细胞成分的相互作用，能一步分离RNA。
使用旧产品（ISOGEN和ISOGEN-LS）需要添加氯仿，要进行液相分离，而本产品则无需此步骤。在样品中加入ISOGEN II溶解或是均质之后，添加水， DNA、蛋白质、多糖类等沉淀（不溶化），进行离心分离后可以去除（右图）。用酒精沉淀、洗净、溶解上清液之后，能分离出高纯度的RNA。若配合ISOGENOME使用，也能够跟ISOGEN一样从同一样本中提取DNA。
◆特点
• 无需使用氯仿分离RNA
• 相比旧产品（ISOGEN等），小RNA的提取率更高
• 可以把高分子RNA（＞200 bases）和小RNA（＜200 bases）分离（也有不分离的方案）
• 混入的DNA较少，提取的RNA可以直接使用RT-PCR和定量RT-PCR
• 约一小时内可提取出RNA
◆用途
从活体组织提取RNA等等
◆产品列表
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ISOGEN II （10 mL、100 mL）
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产品
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包装
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保存条件
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备注
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ISOGEN II
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1瓶
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2～10°C
(阴暗处)
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非医疗用剧毒物
外观：青色溶液
容器（塑料瓶）外配有袋子。
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运输方法
本品在室温下运输。产品到达后，在2~10℃条件下保存即可正常使用。
◆使用案例
操作流程
?除了本产品，根据需准备RNase free water、乙醇、4-溴甲氧基苯异丙醇。
?可使用聚丙烯管，使用前确认是否能够承受离心强度（12K × g）及ISOGEN II（苯酚）。
?离心操作建议在4-28℃进行。
实验数据
1. 提取的RNA的电泳
2. 检验出miRNA
3. RT-PCR
4. RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
5. RNA取量的基准
6. 使用ISOGEN II从植物提取总RNA
7. 使用ISOGEN II从植物提取高分子RNA及小RNA分离＜改变流程＞
Data 1：提取的RNA的电泳
按照ISOGEN及ISOGEN Ⅱ的操作顺序，提取RNA，进行电泳。
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琼脂糖凝胶电泳
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M: RNA Ladder (编号:311-06261)
道1：ISOGEN 提取 总RNA (2 μg)
道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (2 μg)
道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (2 μg)
道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.2 μg)
1.2% Agarose S （甲醛变性）
EtBr 染色
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聚丙烯酰胺凝胶电泳
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道1：ISOGEN 提取 总RNA (5 μg)
道2：ISOGENⅡ 提取 总RNA (5 μg)
道3：ISOGENⅡ 提取 高分子RNA (5 μg)
道4：ISOGENⅡ 提取 小RNA (0.5 μg)
12% 聚丙烯酰胺凝胶 （Urea 变性）
EtBr 染色
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? 道1、2中，ISOGENⅡ与ISOGEN一样，可提取全DNA。
? 道3、4中，ISOGENⅡ可区分200bases以上的高分子RNA及10~200bases的小RNA。
Data 2：检验miRNA
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对使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ提取的总RNA进行3D-Gene Human miRNA Oligo chip分析
? ISOGEN Ⅱ比ISOGEN更能显示miRNA。
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Data 3：RT-PCR
使用ISOGEN 及ISOGEN Ⅱ从Hela细胞提RNA作为模板。通过RT-PCR检测出β-actin基因。同时，进行不产生RT反应的控制组实验。
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PCR条件
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1：模板RNA量 500 ng
2：模板RNA量 100 ng
3：模板RNA量 20 ng
M：Gene Ladder
（编号：316-06951）
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? 使用ISOGEN Ⅱ提取的RNA比使用ISOGEN抽提的RNA混入DNA较少。
Data 4：RNA提取共沉淀剂效果（测定吸光度）
ISOGEN Ⅱ的使用指南中分离小RNA时，对使用共沉淀剂Ethachinmate（Nippon Gene 产品编号：312-01791）或者Glycogen（和光纯药工业 产品编号：077-05311）时提取到小RNA情况进行了比较。
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方法
按照使用指南，从Hela细胞及小鼠肝脏回收小RNA，检测吸光度，计算小RNA的含量。将使用Ethachinmate提取到的数量看作1，在图表中列出了含量的相对值。
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? 使用Glycogen作为共沉淀剂回收小RNA时的回收量较多，变异较少。
Data 5：RNA取量的基准
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实验材料
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高分子 RNA 的离析
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总 RNA的离析
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组织
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肝脏
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5～7 µg RNA/mg tissue
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6～8 µg RNA/mg tissue
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肾脏、脾脏
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3～4 µg RNA/mg tissue
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3～4 µg RNA/mg tissue
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骨骼肌脑、肺
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0.5～1.5 µg RNA/mg tissue
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0.5～1.5 µg RNA/mg tissue
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胎盘
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1～3 µg RNA/mg tissue
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1～3 µg RNA/mg tissue
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培养细胞
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上皮细胞
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5～8 µg RNA/106 cells
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5～10 µg RNA/106 cells
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成纤维细胞
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3～5 µg RNA/106 cells
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4～6 µg RNA/106 cells
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Data 6：使用ISOGEN II从植物提取总RNA
从植物抽提全RNA例子
Data 7：使用ISOGEN II从植物抽提高分子RNA及小RNA分离＜变化流程＞
从植物抽提高分子RNA及小RNA离析例子
◆注意事项
• 本品是实验研究用的试剂，不能作为医药品或其他目的使用。另外，如果您对试剂的基本的知识不了解，请不要使用。
• ISOGEN II是非医疗用剧毒物（苯酚制剂），请小心操作。
• 使用时请穿着适当的防护设备（手套、眼镜等）。
• 操作场所保持通风，以免吸入蒸汽。
• 如果接触皮肤或眼睛，请用大量的水冲洗15分钟或以上，并及时就诊。
• 请按照说明书进行操作。
• 对于因不按照说明书操作而导致的事故，Nippon Gene不负任何责任。
◆备注
本产品是实验研究用试剂，请勿用作医疗用途。
产品列表
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
| 317-07363 | ISOGEN II | 10 mL |
| 311-07361 | ISOGEN II | 100 mL |
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| 官网：www.cxbio.com | 微信服务号：iseebio | 微博：seebiobiotech |
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| 商城：mall.seebio.cn | 微信订阅号：seebiotech | 泉养堂：www.canmedo.com |
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