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Phos-tag(TM) 凝胶荧光染料

来源:作者:人气:-发表时间:2025-04-23 10:20:00【
Phos-tag™ 凝胶荧光染料
 
Phos-tag™ 凝胶荧光染料,是一种可在生理pH范围内,对凝胶中的磷酸化蛋白进行染色的荧光染料。进行了SDS-PAGE,用本产品处理聚丙烯酰胺凝胶,可以对磷酸化蛋白进行特异性染色。
本系列有波长不同的 Yellow(黄)、Magenta(品红)、Cyan(蓝绿)、Aqua(浅绿)四种颜色。每管规格为 0.2 mg,可对约20个迷你凝胶进行染色。
购买前请注意:
使用Phos-tag 凝胶荧光染料,需要用到 Mixed reagents for Phos-tag™ Common Solution 5×(产品编号:383-15231)。请一同购买。
041572850405.png
◆特点
● 高灵敏度
● 在生理pH下即可染色
● 选择性与pSer、 pTyr、 pHis以及pAsp残基结合
● 无需放射性物质、化学物质标签、抗体
● 2小时内完成染色
◆产品对比
其他公司产品A
● 凝胶pH:2~4
● 5个步骤(固定、清洗、染色、脱色、清洗)
● 所需时间:≧5小时
● 溶液更换次数:11次
● 卵清蛋白检测上限:~5 ng/lane
Phos-tag™ Magenda(品红)
● 凝胶pH:7~8(不进行脱磷酸化)
● 3个步骤(固定、染色、清洗)
● 所需时间:≦2小时
● 溶液更换次数:4次
● 卵清蛋白检测上限:~1 ng/lane
◆应用实例①
磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白的染色 Phos-tag™ Aqua(浅绿)
041572850651.png
Lane.No.()内为磷酸基团数目
1. Marker
2. α-酪蛋白(9P)
3. 经ALP处理的α-酪蛋白
4. β-酪蛋白(5P)
5. 经ALP处理的β-酪蛋白
6. 卵清蛋白(2P)
  7. 经ALP处理的卵清蛋白
  8. 胃蛋白酶(1P)
  9. 经ALP处理的胃蛋白酶
10. β-半乳糖苷酶
11. 牛血清白蛋白
12. 碳酸酐酶
Phos-tag™ Aqua(浅绿)染料选择性:用Phos-tag™ Aqua(浅绿)对10%(w/v)的PAGE胶进行染色,其中分别含有四组完整的以及经ALP(碱性磷酸酶)处理的磷酸蛋白(α-酪蛋白,β-酪蛋白,卵清蛋白和胃蛋白酶各1 μg)(左),然后使用考马斯亮蓝CBB G-250染色(右)。
成功特异性地检测出SDS-PAGE后的磷酸化蛋白。
数据提供:广岛大学研究生院 医学系科学研究科 医药分子机能科学研究室 木下惠美子老师、木下英司老师、小池透老师
◆应用实例②
使用Phos-tag™ 荧光凝胶染料的组氨酸、天门冬氨酸的磷酸化分析
细菌通过将信息从组氨酸激酶EnvZ传递到应答调控子OmpR来调节基因的表达。分别分析有自磷酸化能力的EnvZ激酶和被EnvZ催化的OmpR中组氨酸和天门冬氨酸的磷酸化。
041572851003.jpg
041572851086.jpg
可以确认Phos-tag™ Magenta(品红)和Phos-tag™ SDS-PAGE 这两种试剂中的His和Asp的磷酸化随激酶的处理时间经过不断增强。尤其是使用Phos-tag™ Magenta(品红)时,可以仅检测出His磷酸化或Asp磷酸化。
数据提供:广岛大学研究生院 医学系科学研究科 医药分子机能科学研究室 木下惠美子老师、木下英司老师、小池透老师
◆应用实例③
用于筛选组氨酸激酶抑制剂(新型抗生素)
使用Phos-tag™荧光凝胶染料,筛选组氨酸激酶抑制剂。
041572851155.jpg
证实磷酸化依赖组氨酸激酶抑制剂浓度被抑制。
数据提供:广岛大学研究生院 医学系科学研究科 医药分子机能科学研究室 木下惠美子老师、木下英司老师、小池透老师
参考文献
“Quantitativemonitoring of His and Asp phosphorylation in a bacterial signaling system byusing Phos-tag Magenta/Cyan fluorescent dyes”, Emiko Kinoshita-Kikuta, HiroshiKusamoto, Syogo Ono, Keisuke Akayama, Yoko Eguchi, Masayuki Igarashi, ToshihideOkajima, Ryutaro Utsumi, Eiji Kinoshita, Tohru Koike, Electrophoresis, 2019
◆使用方法
041572851288.jpg
※调整平衡及清洗溶液以及染色溶液必须使用Mixed reagents for Phos-tag™ Common Solution 5× (产品编号:383-15231)。
◆激发波长/荧光波长
Phos-tag™ Yellow(黄) Phos-tag™ Magenta(品红)
图片.png 图片.png
Ex/Em=505 nm/514 nm
Ex/Em=547 nm/561 nm
Phos-tag™ Cyan(蓝绿) Phos-tag™ Aqua(浅绿)
图片.png 图片.png
 Ex/Em=643 nm/661nm Ex/Em=551 nm/564 nm
产品列表
产品编号 产品名称 产品规格
380-15241 Phos-tag™ Yellow 
Phos-tag™ 黄色荧光染料
0.2 mg
386-15221 Phos-tag™ Magenta  
Phos-tag™ 品红荧光染料
0.2 mg
382-15201 Phos-tag™ Aqua  
Phos-tag™ 浅绿荧光染料
0.2 mg
389-15211 Phos-tag™ Cyan  
Phos-tag™ 蓝绿荧光染料
0.2 mg
383-15231 Mixed reagents for  
Phos-tag™ Common Solution 5×  Phos-tag™ 5×染色通用混合溶液
1 EA
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1 set

 

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