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泛素化试剂盒 Ubiquitinylation kit

来源：作者：人气：-发表时间：2025-05-16 10:14:00【大中小】

Ubiquitinylation kit

泛素化试剂盒

◆用于合成泛素-E2硫酯的多功能工具

●　能合成一系列由硫酯连接的泛素缀合酶E2的理想方法

●　生物素化的泛素能对连接了链霉亲和素的酶进行灵敏检测

●　试剂盒供50次50 μL的反应使用

泛素化试剂盒是一套在泛素化实验中用于合成泛素-E2硫酯的试剂。该试剂盒利用泛素级联反应中前两个步骤来产生一系列由硫酯连接的泛素缀合酶（E2s）；用于将泛素转移至E3泛素连接酶；然后对靶蛋白进行泛素化。生物素化的泛素能有助硫酯的形成，并能对泛素缀合物进行高灵敏度检测。

建议用法

1.　合成用于泛素化实验的泛素-E2硫酯；

2.　在专用的E3泛素连接酶的参与下对靶蛋白进行泛素化；

3.　对用于与新型E2酶通过硫酯连接的泛素进行活化；

4.　使用细胞裂解液或粗提物/制备剂为来源的E3泛素连接酶来促进泛素化；

5.　不依赖底物（目标蛋白）的体外泛素化反应。

图1.

酯测试Western Blotting能够适用于所有E2缀合酶。操作步骤按照“Assay Protocol”部分所述的进行。

生物素化-泛素-酶共聚物通过蛋白质印迹法的硫酯测试来检测，其中分别包括：

A：UbcH1（Prod. No. BML-UW9020）

B：UbcH2（Prod. No. BML-UW9025）

C：UbcH3（Prod. No. BML-UW8730）

D：UbcH5a（Prod. No. BML-UW9050）

E：UbcH5b（Prod. No. BML-UW9060）

F：UbcH5c（Prod. No. BML-UW9070）

G：UbcH6（Prod. No. BML-UW8710）

H：UbcH7（Prod. No. BML-UW9080）

I：UbcH8（Prod. No. BML-UW9135）

J：UbcH10（Prod. No. BML-UW0960）

K：Ubc13/MMS2（Prod. No. BML-UW9565）

而使用“Analysis by Western Blotting”部分所述的链霉亲和素-辣根过氧化物酶检测系统的有M：生物素化SDS分子量标记（Sigma, SDS-6B）从下到上：20.1, 29.0, 39.8, 58.1 kDa。

◆产品规格

应用注释	用法： 1. 在专用的E3泛素连接酶参与下对靶蛋白进行泛素化。E2的家族能够产生E2-Ub硫酯缀合物以用于测试，以及与特定E3/靶蛋白的结合。例如：p53在mdm2（E3）和UbcH5b（E2）10的参与下进行泛素化。 2. 活化用于将硫酯与新型E2酶缀合的泛素。（在直接可比的条件下，可使用试剂盒中的E2s作为替代） 3. 使用细胞裂解液或粗提物/制备液作为E3泛素连接酶的来源，在泛素化试剂盒组分的参与下，促进已纯化的靶蛋白的泛素化。 4. 不依赖底物（目标蛋白）的体外泛素化反应。确定E3酶的泛素连接活性/特异性以及它们的催化结构域/片段11。注：应用1和2提供的方案可以通过包含、省略或替代特定的酶组分来修改，从而应用于其他实验。
质量	试剂盒包含了足够进行4次含有E2酶反应的材料。
使用/稳定性	试剂盒的所有组分应在-80°C下储存以确保稳定性和活性。
储存	避免反复冻融
运输	干冰运输
长期储存	-80℃
组分	20×泛素活化酶溶液人，重组 E1（His6-tagged），125 µL，产品编号BML-UW9410 10×泛素缀合酶溶液（E2）每种E2酶有20 µL UbcH1（His6-tagged），产品编号：BML-UW9020 UbcH2（His6-tagged），产品编号：BML-UW9025 UbcH3（His6-tagged），产品编号：BML-UW8730 UbcH5a（His6-tagged），产品编号：BML-UW9050 UbcH5b（His6-tagged），产品编号：BML-UW9060 UbcH5c（His6-tagged），产品编号：BML-UW9070 UbcH6（His6-tagged），产品编号：BML-UW8710 UbcH7（His6-tagged），产品编号：BML-UW9080 UbcH8（His6-tagged），产品编号：BML-UW9135 UbcH10（untagged），产品编号：BML-UW0960 UbcH13/Mms2（His6-tagged），产品编号：BML-UW9565 20×生物素化泛素溶液（Bt-Ub）, 125 µL，产品编号：BML-UW8705 20×Mg-ATP溶液，125 µL，产品编号：BML-EW9805 2×非还原性凝胶上样缓冲液，2.5 mL，产品编号：BML-KW9880 10×泛素化缓冲液，250 µL，产品编号：BML-KW9885

产品编号	产品名称	产品规格
BML-UW9920-0001	Ubiquitinylation kit 泛素化试剂盒	1 kit

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