具体的操作步骤如下（以10 mL活化胶偶联BSA为例）：

1. 清洗：用10-20倍胶体积的去离子水冲洗（大于5次）保存于异丙醇的环氧活化胶，除去异丙醇，抽干，将10 mL（约7.5 g）加入到30 ml的反应器（磨口三角瓶）中，备用。
2. 偶联：称取100 mg BSA，溶解于15 mL 0.1 M碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（pH 10.5），加入到抽干的活化胶中，在摇床上振荡，37℃偶联12-24 h；反应完毕后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，收集料液用于未偶联 BSA的分析和偶联配基密度的计算，偶联配基的微球水洗后抽干。其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（pH、温度、时间、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。若配基含有游离巯基，可选用0.1 M硼砂-硼酸缓冲液，pH 8.6，通过巯基进行偶联。（偶联注意事项：偶联氨基可选用pH 9-13的缓冲液，偶联巯基可选用pH 8.6的缓冲液；避免使用可以和环氧基反应的含氨基的缓冲液，可选用磷酸盐、碳酸盐、硼酸盐和氢氧化钠溶液；pH越高、温度越高，偶联速度越高；时间越长，偶联反应越彻底，但偶联条件的选择还要兼顾配基的稳定性。）
3. 封闭：将10 mL抽干的偶联BSA的胶加入到100 mL三角瓶中，加入30 mL 1 mol/L乙醇胺，pH 10.5溶液（或0.1 mol/LTris-HCl，pH 10.5）。反应温度恒定在37℃，搅拌速度120 rpm，反应时间4 h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。
4. 清洗：偶联BSA的介质依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复交替清洗3次），抽干，去除未反应的配基。
5. 保存：保存于4℃、20%乙醇溶液中。

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