microRNA和piRNA研究

来源：作者：人气：-发表时间：2014-07-09 14:43:00【大中小】

microRNA和piRNA研究

AGO蛋白家族

AGO蛋白家族是指与以小分子RNA(small RNA)为介质的遗传基因发现控制机构有关的蛋白质群。基于氨基酸序列的相似性，AGO蛋白家族又分为AGO亚族与PIWI亚族，已发现在生殖细胞、干细胞（ES、iPS等）中有表达。

和光纯药公司推出了众多用于对miRNA和mRNA（存在于细胞和组织中的RISC的组成成分）进行功能分析的工具，这些工具不仅适用于对miRNA的分析，同时也适用于对靶标mRNA的分析。

	AGO蛋白家族
	AGO亚族	PIWI亚族
人	AGO1, AGO2, AGO3, AGO4	PIWIL1 / HIWI, PIWIL2 / HILI, PIWIL3, PIWIL4 / HIWI2
鼠	AGO1, AGO2, AGO3, AGO4	PIWIL1 / MIWI, PIWIL2 / MILI, PIWIL4 / MIWI2
RNA结合蛋白	microRNA、siRNA等	piRNA等

1. microRNA研究
 （1）microRNA纯化试剂盒系列：
（2）cDNA编码microRNA试剂盒的制备
 （3）抗体
2. piRNA研究

【产品信息】

1. microRNA研究

microRNA（简称miRNA）是一种长约22个nt（核苷酸）的内源性RNA分子，通过与靶标mRNA的互补配对，可抑制mRNA的裂解和翻译，从而在动植物体内发挥重要的调控作用。据推测，在人体和鼠体内存在上千种miRNA，因此对于miRNA的各种研究（例如对功能不明的新型miRNA的鉴定以及对与特定疾病相关的miRNA功能的说明等）迅速发展成为一大研究领域。近来，血清中存在miRNA这一重大事实的发现，开创了利用miRNA作为生物标志物进行包括癌症在内的疾病治疗的医学未来。一般认为，microRNA发挥作用的方式如下：先在细胞中经过多个阶段发育成熟，再与蛋白质结合生成蛋白质复合物“RISC”（“RNA诱导沉默复合物”），然后与RISC主要组成部分AGO亚族蛋白结合，后再与靶标mRNA结合，从而达到降解mRNA链或抑制翻译的目的。

人体中存在4种AGO亚族蛋白（hAgo1～hAgo4），可泛表达基因信息，但表达水平因类型而异。在AGO亚族蛋白中，只有AGO2具备对靶标RNA 裂解的切割酶活性，因此是一种具表达水平的蛋白质，可在miRNA合成途径中发挥至关重要的作用。由于RISC能够与AGO蛋白抗体发生免疫沉淀，因此可从RISC沉淀物中回收miRNA；而且进一步研究表明，靶标miRNA为共沉淀剂，因此免疫沉淀成法为研究miRNA功能的基本方法。

鉴于上述情况，和光纯药特别推出了众多对miRNA功能进行分析的工具，其中主要为利用抗AGO抗体的miRNA研究工具。通过组合使用上述工具，即可实现对miRNA和mRNA（存在于细胞和组织中的RISC的组成成分）的综合分析— miRNA分析和靶标mRNA分析。

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（1） microRNA纯化试剂盒系列：

一种基于利用AGO蛋白抗体的免疫沉淀方法

特性：

1）适用于内源性AGO蛋白的免疫沉淀法
2）miRNA与AGO蛋白结合的纯化性能高
3）其他RNA（如rRNA（核糖体）和RNA的降解片段）的污染度低
4）适用于microRNA的高效克隆以及纯化microRNA成分的微阵列技术（测定基因表达谱的方法和技术）

microRNA提取试剂盒，人/鼠AGO1（10次反应；产品编号：291-70201）
microRNA提取试剂盒，人AGO2（10次反应；产品编号：292-66701）
microRNA提取试剂盒，鼠AGO2（10次反应；产品编号：292-67301）
microRNA提取试剂盒，人AGO3（10次反应；产品编号：297-70301）

如果您对上述产品感兴趣，请致电400-021-8158了解更多详细情况!

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（2）cDNA编码microRNA试剂盒的制备

和光纯药microRNA克隆试剂盒可以用于制备cDNA编码microRNA，只需在microRNA片段制备后的1.5日之内即可完成克隆过程。该试剂盒中含有从虾中提取的碱性磷酸酶（SAP），能与其中的耐热性单链DNA连接酶（另售）和原改良接头发生连接反应。与传统方法（利用从细菌中提取的碱性磷酸酶和T4 RNA连接酶）相比，克隆效率显著提高。

特点：

1）耐热性连接酶能够实现接头的准确连接，从而提高克隆效率
2）适用于microRNA克隆以形成二级结构
3）操作简单，只需在1.5日之内即可生成cDNA编码microRNA

和光microRNA克隆试剂盒（8次反应；产品编号：290-66501）

接头连接高效、准确、简捷

耐热性单链DNA连接酶重组体解决方案（200个单位（产品编号：298-65103）；500个单位（产品编号：292-65101）

和光靶标mRNA克隆试剂盒（10次反应；产品编号：298-68001）

和光纯药生产的靶标mRNA克隆试剂盒用于借助微量mRNA实现cDNA扩增，尤其是利用AGO IP RNA片段实现microRNA靶标mRNA克隆。扩增后的cDNA将成为microRNA的靶标mRNA。

特点：

1）方法简易
2）具备实现微量mRNA扩增的性能
3）cDNA扩增方式不依赖于mRNA的长度
4）适用于microRNA靶标mRNA的研究

和光PCR纯化试剂盒（30次反应（产品编号：298-67901）

和光纯药生产的PCR纯化试剂盒，用于在利用RT-PCR或PCR完成DNA合成后的仅10分钟内去除在各种分子生物学试验反应缓冲液中形成的引物、引物二聚体、dNTP（三磷酸脱氧核苷酸）以及诸如DNA聚合酶、限制性内切酶等多种酶。

THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液） （250个单位；产品编号：317-07081），PCR（聚合酶链式反应）用耐热性DNA聚合酶

建议采用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）来抑制非特异性扩增。THUNDER Taq Gold DNA聚合酶用于PCR的热启动，在进入PCR循环前，在95℃的温度下经过10分钟的热处理后被活化。由于利用THUNDER Taq Gold DNA聚合酶（不含镁离子的缓冲液）方式实现扩增后的DNA片段是一种腺嘌呤的3'末端，因此能够直接插入到T载体中。

如果您对上述产品感兴趣，请致电400-021-8158了解更多详细情况!

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（3）抗体

AGO1抗体、单克隆抗体（1F2）
（50μL（产品编号：018-22401））〈用于蛋白质印迹法〉
AGO1抗体、单克隆抗体（2A7）
（50μL（产品编号：015-22411））〈用于免疫沉淀法〉
抗人AGO2抗体、单克隆抗体（4G8）
（50μL（产品编号：011-22033）；100μL（产品编号：015-22031）
〈用于蛋白质印迹法、免疫沉淀法以及免疫细胞化学染色法〉
抗小鼠AGO2抗体、单克隆抗体（2D4）
（50μL（产品编号：014-22023）；100μL（产品编号：018-22021）
〈用于蛋白质印迹法、免疫沉淀法以及免疫细胞化学染色法〉
抗人AGO3抗体、单克隆抗体（1C12）
（50μL（产品编号：018-23241））〈用于免疫沉淀法〉

如果您对上述产品感兴趣，请致电400-021-8158了解更多详细情况!

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2. piRNA研究

PIWIL1抗体、单克隆抗体（2C12）
(100 μL （产品编号：017-23451））〈用于免疫沉淀法〉

特点：

1) 可免疫沉淀内在性PIWIL1蛋白质。（5～10µg浓度为10%的蛋白G微珠）
2) 可免疫沉淀PIWI1结合piRNA。
3) 可在人、鼠的组织和细胞中使用。

使用例：

(1) 小鼠精巢中内源性PIWIL1的免疫沉淀（IP)-1

Lane 1: NEC14 cells, mouse IgG IP分级 (1/2 vol.)
Lane 2: NEC14 cells, 2C12 IP分级 (1/2 vol.)
Lane 3：小鼠精巢 IgG IP分级 (1/2 vol.)
Lane 4：小鼠精巢, 2C12 IP分级 (1/2 vol.)

Cell number: 1 x 107 cells
组织（小鼠精巢）重量 25mg
第一抗体（蛋白质印迹）
Anti PIWIL1 polyclonal antibody
(gifted from Dr. Miyagawa, Osaka Univ.)
This antibody is not available from Wako.

(2) 小鼠精巢中内源性PIWIL1的免疫沉淀（IP)-2

Lane M：分子量Marker
Lane 1：小鼠IgG IP分级 (1/2 vol.)
Lane 2: 2C12 IP分级 (1/2 vol.)
组织（小鼠精巢）重量 25mg
第一抗体（蛋白质印迹）
Anti PIWIL1 polyclonal antibody
(gifted from Dr. Miyagawa, Osaka Univ.)
This antibody is not available from Wako.

(3) PIWIL1结合piRNA的精制