激酶分析筛选试剂盒 Fluorospark(R) Kinase/ADP Multi-Assay Kit

来源：作者：人气：-发表时间：2025-07-18 11:06:00【大中小】

激酶分析筛选试剂盒

Fluorospark® Kinase/ADP Multi-Assay Kit

Fluorospark^® Kinase/ADP Multi-Assay Kit 是富士胶片和光与日本东京大学新药研究机构共同研发的 ADP 荧光检测试剂盒。拥有高通量筛选（HTS）所必须的高灵敏度、高准确度、低成本、简便等特性。本产品不仅可检测激酶，同时可用于检测产生 ADP 的酶（如 ATP 酶、乙酰基— CoA 羧化酶）的活性。

◆原理

本试剂盒通过酶偶联反应简单、高灵敏度的定量检测 ADP 。通过激酶反应产生的 ADP 用红色荧光物质试卤灵定量。

◆优点、特色

● 适合终点（endpoint）和实时实验

● 优异的 Z'-factor 数据（数据差异小）

● 高灵敏度检测 ADP 量

● 检测直到 ADP 30 μmol/L 仍可保持线性关系

● 一步反应，检测时间短（~30分钟）

● 成本较低

与传统方法（发光）比较

试剂名称	Fluorospark^® Kinase	传统发光法（Ａ公司）
原理	ADP 定量（荧光）（直接定量生成的 ADP）	ADP 定量（发光）（需要把生成的 ADP 变换成 ATP 再定量）
操作顺序	１步	２步
所需时间	30 分钟	70~100 分钟
ADP 定量范围	~30 μmol/L	~1 mmol/L
价格	低成本	高成本
优点	Z'-factor 数值高适合实时、终点反应	动态范围大 S/B 比高

◆ 试剂盒组成

No. 试剂	用途	1,000次
底物液	2×制备检测液	9 mL
酶液		500 μL
刃天青液		100 μL
还原封闭剂		400 μL
D 终止液	停止偶联反应	10 mL
10 mmol/L ATP 溶液	激酶反应，制作标准曲线	100 μL
10 mmol/L ADP 溶液	制作标准曲线	100 μL

◆案例、应用

【实验流程（终点（endpoint）法）】

激酶反应液里添加等量的2×检测液（使用时制备）即可检测激酶活性

【制作 ADP 标准曲线】

用 0、10、20、30 μmol/L ADP 制作标准曲线。

良好的线性关系可定量最多至 30 μmol/L 的 ADP。

【低浓度 ADP 区域里定量】

制作各 ATP/ADP 浓度（ATP+ADP=1,10,100 μmol/L）里底物变换率 0-10% 标准曲线

ATP/ADP标准曲线里底物变换率低（=ADP浓度低）时线性关系依然较好

【荧光信号的稳定性】

20 μmol/L ADP 和 2x检测液混合，在30分钟~7小时候检测荧光强度。30分钟后的荧光强度标准化为100%，相关变动表格如下。

ADP和2×检测液混合后，在30分~7小时内的荧光信号十分稳定。

【数据：Z'-factor 实测值】

定量与各 ATP/ADP 浓度（ATP+ADP=1,10,100 μmol/L），5%底物变换率相当的 ADP 时，本试剂盒方法与传统发光法的 Z'-factor 比较。

Z'-factor：Fluorospark^® Kinase >传统发光法（Ａ公司）
在各ATP浓度里，5%低底物变换率也有优异的 Z'-factor。

什么是 Z'-facotr

Z'-facotr 是一个关于信号区间和变异的组合，它已成为评估测试方法质量的主要参数。使用 Z'-factor = 1 - (3×SDH + 3×SDL)/(AvH-AvL) 公式计算（SDH 和 SDL 为阳性对照和阴性对照的方差，AVH 和 AVL 为阳性对照和阴性对照的平均值）。

Z-factor	Interpretation
1.0	理想情况下等于 1.0。Z factor 永远不可能超过 1.0。
0.5 - 1.0之间	较好的实验。
0 - 0.5 之间	临界的实验（较差的实验）。
小于0	阳性对照和阴性对照的数值有很多重叠。

【制作抑制曲线】

制作 cAMP- 依赖性蛋白激酶（PKA）抑制剂 H-89 的抑制曲线

（PKA 0.02 U/μL，ATP 5 μmol/L，Kemptide 125 μg/mL 及各浓度的 H-89）

Fluorospark^® Kinase 与传统发光法（Ａ公司）有几乎相同的 IC₅₀值。
（本方法得到的 H-89 IC₅₀值与文献值*（IC₅₀=40nmol/L）几乎相同）
* Hidaka, H. et al., Methods Enzymol., 201, 328-39(1991).

【实验流程（实时法）】