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腺病毒抗原(HAdV)-免疫层析(胶体金及彩色乳胶)解决方案

来源:作者:人气:-发表时间:2023-12-18 08:54:00【
腺病毒抗原(HAdV)-免疫层析
1. 项目背景
摘自《儿童腺病毒肺炎诊疗规范(2019年版)》
人腺病毒(Human adenovirus, HAdV)肺炎(以下简称腺病毒肺炎)是儿童社区获得性肺炎中较为严重的类型之一,多发于6个月至5岁儿童,部分患儿临床表现重,肺外并发症多,重症病例易遗留慢性气道和肺疾病,是目前造成婴幼儿肺炎死亡和致残的重要原因之一,需要高度关注。
1.1病原学
HAdV属于哺乳动物腺病毒属,为无包膜的双链DNA病毒,1953年由Rowe等首次发现。目前已发现至少90个基因型,分为A~G共7个亚属,不同型别HAdV的组织嗜性、致病力、流行地区等特性不同。HAdV感染可引起多种疾病,包括肺炎、支气管炎、膀胱炎、眼结膜炎、胃肠道疾病及脑炎等。与呼吸道感染相关的HAdV主要有B亚属(HAdV-3、7、11、14、16、21、50、55型),C亚属(HAdV-1、2、5、6、57型)和E亚属(HAdV-4型)。腺病毒肺炎约占社区获得性肺炎的4%~10%,重症肺炎以3型及7型多见,HAdV-7B型是2019年我国南方发病地区主要流行株。
1.2流行病学
人腺病毒感染潜伏期一般为2~21 d,平均为3~8 d,潜伏期末至发病急性期传染性最强。有症状的感染者和无症状的隐性感染者均为传染源。传播途径包括:(1)飞沫传播:是呼吸道感染腺病毒的主要传播方式;(2)接触传播:手接触被腺病毒污染的物体或表面后,未经洗手而触摸口、鼻或眼睛;(3)粪口传播:接触腺病毒感染者的粪便。腺病毒肺炎最常发生于6个月~5岁,尤其是2岁以下儿童。患慢性基础疾病和免疫功能受损者(如器官移植、HIV感染、原发性免疫缺陷等)更易发生重症。
1.3实验室检查
(1)病毒分离和血清学鉴定:传统的病毒分离和血清分型方法虽是诊断腺病毒的金标准,但不适于临床早期诊断。
(2)抗原检测:针对腺病毒衣壳六邻体抗原进行检测,多采用免疫荧光方法,标本为鼻咽抽吸物、鼻咽拭子、痰液及肺泡灌洗液,发病3~5 d内检出率最高,重症病例2~3周仍可阳性。
(3)PCR检测:比传统的病毒培养和病毒抗原检测敏感性更高,标本为鼻咽拭子或痰液、支气管肺泡灌洗液等。实时定量PCR可对病毒进行定量分析,帮助预测病情严重程度。
(4)其他方法:宏基因测序在诊断腺病毒感染以及分型方面具有优势,但价格昂贵,结果需要专业人员判定,不推荐常规开展。该方法主要用于特殊人群,如合并基础疾病、免疫缺陷病、其他方法检测阴性或病情危重,以及混合感染需尽早明确病原的患儿,结果判断必须结合临床。
本文所述人腺病毒抗原检测试剂是指利用胶体金免疫层析法或彩色乳胶免疫层析法等基于抗原抗体反应原理,针对婴幼儿粪便标本中的腺病毒抗原进行体外定性检测的试剂,辅助医生诊断。
2.测试方案及性能表现
2.1胶体金免疫层析平台:
2.1.1抗体配对组合腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309D)标记胶体金(喷在释放垫上)+腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309C)划膜;
2.1.2 腺病毒(ADV)抗原(货号:EKY0218B用合适的稀释液依次稀释到10ug/mL、5ug/mL、1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL。
2.1.3反应模式:10uL样品+90uL稀释液混匀,取80uL混合液上样,反应时间15min-20min;
2.1.4 实验结果:在胶体金免疫层析平台,采用此抗体配对组合测试腺病毒(ADV)抗原稀释梯度均显色,测试三例阴性样品均不显色,灵敏度可达10ng/mL,表明此抗体配对在胶体金层析平台测试性能良好。

胶体金层析平台测试示意图
2.2彩色乳胶免疫层析平台:
2.2.1抗体配对组合:腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309C)标记彩色乳胶(喷在释放垫上)+腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309D)划膜
2.2.2 ADV腺病毒抗原(货号:EKY0218B用合适的稀释液依次稀释到10ug/mL、5ug/mL、1ug/mL、0.1ug/mL、50ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、1ng/mL、0.2ng/mL。
2.2.3反应模式:10uL样品+90uL稀释液混匀,取80uL混合液上样,反应时间15min-20min;
2.2.4 实验结果:在彩色乳胶免疫层析平台,采用此抗体配对组合测试腺病毒(ADV)抗原稀释梯度均显色,测试三例阴性样品均不显色,灵敏度可达0.2ng/mL,表明此抗体配对在彩色乳胶免疫层析平台测试性能良好。

彩色乳胶层析平台测试示意图
3.产品信息
产品名称
货号
推荐配对
腺病毒(ADV)抗体
EKY0309D
腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309D)标记胶体金+腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309C)划膜(胶体金层析配对组合)
腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309C)标记彩色乳胶+腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309D)划膜(彩色乳胶层析配对组合)
腺病毒(ADV)抗体
EKY0309C
腺病毒(ADV)抗体(货号:EKY0309D)-胶体金浓缩液
DKY1324A
 
腺病毒(ADV)抗体(货号:KY0309C)-彩色乳胶浓缩液
DKY1324B
 
胶体金(40nm,1OD)
DXJ9917B-100ml
 
红色羧基乳胶微球,400nm
DEG0809A-1ml
 
腺病毒(ADV)抗原
EKY0218B
 
 
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