一网打尽内毒素/细菌/真菌检测

来源：作者：人气：-发表时间：2023-09-13 16:01:00【大中小】

一网打尽内毒素/细菌/真菌检测

- 细菌内毒素检测（鲎试剂）

一、细菌内毒素检测背景

内毒素是一种脂多糖（lipopolysaccharide，LPS），来源于革兰氏阴性细菌外膜，其细胞壁外膜的外部脂质成分由内毒素分子组成，细胞死亡或分解后被释放出来。它是一种典型的热原，即使皮克级或纳克级的内毒素进入血液也会引发发热等生物反应。

二、细菌内毒素的检测方法

细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的含量是否符合规定的一种方法。美国，欧洲和日本的药典中包含了三种内毒素检测方法，分别是凝胶法、显色法和浊度法。

三、WAKO 内毒素检测方法选择

凝胶法和动态浊度法通用系列PYROSTAR™ ES-F

凝胶法：定性或半定量检测内毒素，无需检测仪器。

动态浊度法：配合FUJIFILM Wako内毒素检测仪（如Toxinometer® ET-7000），定量检测内毒素，适合检测干扰较小的样品。

FDA认证
特异性检测 不受（1→3）-β-D-葡聚糖的影响
检测范围广 0.001-10 EU/mL（动态浊度法）
准确可靠 各批次灵敏度经美国RSE标定

多次型

产品编号	产品名称	产品规格	凝胶法灵敏度	动态浊法检测范围	是否含内毒素标准品
548-10141	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),0.015EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),0.015 EU/mL	2mL×4	0.015EU/mL	0.001-10EU/mL	是
541-10131	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(2mL),0.03 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),0.03 EU/mL	2mL×4	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
545-10151	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(2mL),0.06 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),0.06 EU/mL	2mL×4	0.06 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
542-10161	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),0.125EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),0.125EU/mL	2mL×4	0.125 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
549-10171	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(2mL),0.25 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),0.25 EU/mL	2mL×4	0.25EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
543-10071	PYROSTAR ES-FM ULTIKIT(5.2mL),0.015 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型5.2mL),0.015EU/mL	5.2mL×4	0.015EU/mL	0.001-10EU/mL	是
542-10041	PYROSTAR ES-F MULTI KIT(5.2mL),0.03EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),0.03EU/mL	5.2mL×4	0.03 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
547-10111	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2 mL),0.06 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),0.06 EU/mL	5.2mL×4	0.06EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
544-10121	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2mL),0.125 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(5.2 mL),0.125EU/mL	5.2mL×4	0.125 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
549-10051	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2 mL),0.25EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(5.2mL),0.25 EU/mL	5.2mL×4	0.25 EU/mL	0.01-10 EU/mL	是
546-10201	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.015EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),大包装，0.015 EU/mL	2mL×100	0.015 EU/mL	0.001-10EU/mL	否
546-10181	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.03 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),大包装，0.03EU/mL	2mL×100	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	否
543-10191	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.06 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),大包装，0.06EU/mL	2mL×100	0.06 EU/mL	0.01-10EU/mL	否
540-10221	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(2mL),BULK,0.125EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(2mL),大包装，0.125EU/mL	2mL×100	0.125 EU/mL	0.01-10EU/mL	否
543-10211	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(2mL),BULK,0.25 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(2mL),大包装，0.25EU/mL	2mL×100	0.25EU/mL	0.01-10EU/mL	否
547-10231	PYROSTAR ES-FMULTIKIT(5.2 mL),BULK,0.015 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(5.2mL),大包装，0.015EU/mL	5.2mL×100	0.015EU/mL	0.001-10EU/mL	否
544-10241	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(5.2mL),BULK,0.03EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),大包装，0.03 EU/mL	5.2mL×100	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	否
541-10251	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(5.2mL),BULK,0.06 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),大包装，0.06 EU/mL	5.2mL×100	0.06EU/mL	0.01-10EU/mL	否
548-10261	PYROSTAR ES-F MULTIKIT(5.2mL),BULK,0.125 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F 多次型(5.2mL),大包装，0.125 EU/mL	5.2mL×100	0.125 EU/mL	0.01-10EU/mL	否
545-10271	PYROSTAR ES-FMULTI KIT(5.2mL),BULK,0.25EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 多次型(5.2mL),大包装，0.25 EU/mL	5.2mL×100	0.25EU/mL	0.01-10EU/mL	否

单次性

产品编号	产品名称	产品规格	凝胶法灵敏度	动态浊法检测范围	是否含内毒素标准品
295-72301	PYROSTAR ES-F Single Test,0.015 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 独立分装，0.015EU/mL	25 tests	0.015 EU/mL	0.001-10EU/mL	是
292-81601	PYROSTAR ES-F Single Test,0.03 EU/mL 鲎试剂PYROSTAR ES-F, 独立分装，0.03 EU/mL	25 tests	0.03EU/mL	0.01-10 EU/mL	是

◆ 适用于动态显色法：Color KY 系列

配合FUJIFILM Wako内毒素检测仪（如Toxinometer® ET-7000）或酶标仪，高灵敏度定量检测，适合检测干扰性强的样品。

产品编号	产品名称	产品规格	灵敏度	检测范围	是否含内素标准品
291-53101	Limulus ColorKY Test Wako 鲎试剂Color KY多次型	60 tests	低至0.0005 EU/mL	0.0005-5 EU/mL	是
291-53601	Limulus ColorkY Single Test Wako 鲎试剂Color KY独立分装	25 tests	低至0.0002 EU/mL	0.0002-5 EU/mL	是

◆ 内毒素检测仪 Toxinometer® ET-7000

支持中国药典中的三种检测方法：浊度法、显色法、凝胶法；
支持美国 / 欧洲 / 日本药典的BET（细胞内毒素检测）；
符合FDA21 CFR Part 11标准，满足数据完整性；
可同时测量16个样本，每个孔位独立检测，并可实时跟踪数据；

产品编号	产品名称	包装
299-35821	Toxinometer ET-7000/E Er/Es Set（套装组成） Toxinometer ET-7000/E（1台） Toximaster® QC8 ER/ES（可供5台电脑使用）计算机（1台） Toximaster® QC8 ER/ES验证资料（1份）	1 set
296-35831	Toxinometer ET-7000/E标准套装（套装组成） Toxinometer ET-7000/E（1台） Toximaster® QC7 计算机（1台）	1 set

产品编号	产品名称	包装
292-35811	Toxinometer ET-7000/E※ Toxinometer ET-7000/E增设用模块	1台
295-33461	Toxinometer ET-7000 Rack Toxinometer ET-7000专用支架	1台

四、检测注意事项

4.1对检测用具的要求

用于内毒素检测的所有检测用具必须不含内毒素和β-葡聚糖。为使内毒素失活，需要在250°C下干热处理超过30 min。建议使用经干热灭菌的玻璃器皿。避免使用金属工具，因为即使有少量被洗脱出的金属离子（例如铁，铝，镓，铬），也可能影响测试。而当使用一次性塑料工具（其制造商未能保证其能用于检测用途）时，检查它们是否满足以下要求（与玻璃器皿相比）：1）未被内毒素污染;2）不吸附内毒素;3）无洗脱物。

4.2内毒素标准品

根据检测目的使用适当类型的内毒素标准品。

•需符合BET（美国药典/ 欧洲药典 / 日本药典）的检测，例如药品和医疗器械的产品最终检验必须使用美国药典，欧洲药典或日本药典标准的内毒素国家标准品。

•对材料，工艺流程和其他相关主题的检测可以使用内毒素工作标准品（CSE）。

4.3 样本干扰

有时候需要采取预防措施，以防止样本对内毒素检测有潜在影响（反应干扰）。这些干扰分为以下两种类型：

（1）对LAL试剂的干扰

•蛋白变性剂（例如酸，碱，尿素，表面活性剂，有机溶剂）

•蛋白酶和蛋白酶抑制剂

•螯合剂（会清除反应所需的钙和镁）

•对于显色法：着色物质（在约405 nm处具有相当大吸收的物质）

•对于浊度法：浊度

（2）对内毒素的干扰

•金属离子（例如铁，铝，镓和铬离子。即使微摩尔级别的存在也会对测试产生影响）

•表面活性剂

样本的干扰效果可以通过进行药典中的干扰因子测试来衡量：即通过对加标了已知量的内毒素的样本进行检测，获得加标内毒素的回收率。如果回收率在50％至200％范围内，则可以确定该样本不会造成影响，换句话说，检测所得的内毒素浓度是正确的。如果发现样本会造成影响，可以通过对样本溶液进行稀释，从而减少对测试的影响。然而，对样本溶液的稀释会提高了由原始溶液（预稀释溶液）的浓度转换而得的内毒素浓度值。合理的稀释倍数（最大有效稀释倍数），是根据待检测的内毒素的所需浓度以及所用LAL试剂的检测灵敏度来确定的。欲了解反应干扰因子和最大有效稀释度的详细信息，详见药典中的细菌内毒素检测。

细菌真菌检测（SLP试剂）

一、检测背景

肽聚糖不仅存在于革兰氏阳性菌，也存在于革兰氏阴性菌中。不管是阳性还是阴性的革兰氏菌，SLP试剂对一般细菌均产生反应。此外，SLP试剂也会对真菌来源的β-葡聚糖起反应，因此SLP试剂可作用于细菌、真菌类的微生物。

SLP试剂虽然会对来源于各类细菌的肽聚糖和带有β-1,3-糖苷键的β-葡聚糖产生强烈反应，但几乎不与作为革兰氏阴性菌细胞壁成分的脂多糖（内毒素）发生反应。能被LAL试剂（鲎试剂）检测出的内毒素不会使SLP的级联机制活化，而SLP试剂能检测无法被鲎试剂检测出的肽聚糖。因此联合鲎试剂与SLP试剂一起使用，可对检测材料中的微生物种类进行预测。

二、检测产品

肽聚糖/β-葡聚糖高灵敏度检测

SLP-HS Single Reagent Set II（以下简称SLP试剂，Silkworn Larvae Plasma，即家蚕幼虫血浆），为由家蚕幼虫血浆精制的冻干试剂。SLP试剂能够与细菌/真菌中的肽聚糖/β-葡聚糖反应，可对包含细菌（革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌）、真菌在内的微生物进行高灵敏度检测。

产品编号	产品名称	产品规格
296-81001	SLP-HS Single Reagent Set II 高灵敏度 SLP 试剂盒Ⅱ（独立包装）	20 tests

内毒素检测相关产品

产品编号	产品名称	产品规格
ESB-0006	ES-Buffer 内毒素特异性缓冲液ES-Buffer	6 vialsx5.2mL
540-10081	Lysate Reagent Water,30 mL 内毒素检测用水，30mL	30 mL×20
540-10081	Lysate Reagent Water,100 mL 内毒素检测用水，100mL	100mL×12
293-51601	Endotoxin Extracting Solution for LAL Test 内毒素LAL试剂提取液	10mL×4
549-10291	ENDOTOXIN INDICATORS, >1000EU/vial 内毒素指示剂（>1000EU/瓶）	25 vials
293-16541	Control Standard Endotoxin 内毒素工作标准品	500 ng （500 ng/vial）

内毒素检测用耗材

产品编号	产品名称	产品规格	尺寸
293-35221	BioCleanPlate Wako 无内毒素96孔板Wako	50 pcs/pk	200 μL
294-35011	BioClean Tips Wako Extend S II 无内毒素移液枪枪头Wako Extend SⅡ	100 tips（100μL）	200 μL
291-35021	BioCleanTip Wako 200Ⅱ 无内毒素移液枪枪头Wako 200Ⅱ	100 tips（200μL）	1000 μL
298-35031	BioCleanTip Wako 1000Ⅱ 无内毒素移液枪枪头Wako 1000Ⅱ	100 tips（1000μL）	96 well