适用于灵长类 ES/iPS 细胞的玻璃化冻存液 StemCell Keep
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灵长类ES/iPS细胞经不起冷冻
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● 使用一般的10%DMSO保存液缓慢冷冻(置于-80°C)时存活率较低
● 细胞集落冻存后存活率仅为0.1~1%
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建议使用玻璃化冻存法进行保存
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● 直接浸没于液氮中防止水结晶化,在非晶质的玻璃状态下冷冻的方法
● 将细胞悬浮于玻璃化溶液中,然后立即将整个冻存管浸没到液氮中,使其玻璃化
● 该方法的优点在于水的体积不会膨胀,因此给细胞带来的损害较少
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传统玻璃化冻存法的问题
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● 玻璃化需要较高的溶质浓度,容易因溶质提高毒性(渗透压)
● 为防止水重结晶,必须迅速解冻
● 需要娴熟的技术
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现有玻璃化冻存法的问题
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● 为小鼠受精卵玻璃化用而开发,以少量溶液(数μL)即可玻璃化为前提。若用于ES/iPS细胞而增加溶液量(约200 μL的话),则会导致玻璃化状态不稳定,容易重结晶
● 现有的玻璃化冻存液所含的乙酰胺具有致癌性,DMSO还会影响分化(Oct4表达降低),因此不受欢迎
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优化玻璃化溶液
开发StemCell Keep
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图1:hiPS细胞细胞集落的密度
![131584069908.jpg 131584069908.jpg](http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/upfiles/images/202003/131584069908.jpg)
图2:解冻后第6天的细胞集落密度(相对值)
![131584069931.jpg 131584069931.jpg](http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/upfiles/images/202003/131584069931.jpg)
图3:hiPS细胞细胞集落的大小
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图4:解冻后第6天的细胞集落大小(相对值)
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图5:hiPS细胞细胞集落的面积占有率
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图6:解冻后第6天的细胞集落面积(相对值)
![131584069989.jpg 131584069989.jpg](http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/upfiles/images/202003/131584069989.jpg)
图7:培养第6天的培养状态
2. 使用剥离液(0.25%胰蛋白酶 / 1 mg/mL胶原酶IV / PBS溶液)使灵长类ES/iPS细胞以细胞集落的形态剥离。
3. 离心2.中回收的细胞,去除培养基。若要冷冻多个时,请提前冷却,逐个进行以下操作。
4. 添加200 μL本产品,仔细移液,盖上盖子后尽快(约1 min内)将vial整个浸没在液氮中。
5. 储存在液氮罐或-130°C的深冷柜中。
![](http://labchem.fujifilm-wako.com.cn/upfiles/images/202003/131584070030.jpg)
2. 将使用本产品冷冻的细胞的冻存管放入杜瓦瓶等盛有液氮的容器中移至生物安全柜。
3. 将取出的冻存管的盖子打开,迅速加入1 mL提前加热的培养基,移液并溶解。
4. 将3.中的全部溶液转移到1.中准备的加入了9 mL培养基的离心管中,离心并清洗。
5. 播种至饲养细胞上进行培养。
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
VPL-A1 | StemCell Keep 无DMSO 干细胞冻存液 |
20 ml |
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官网:www.cxbio.com | 微信服务号:iseebio | 微博:seebiobiotech |
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商城:mall.seebio.cn | 微信订阅号:seebiotech | 泉养堂:www.canmedo.com |
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