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糖类抗原19-9(CA19-9)-磁微粒化学法学发光(吖啶酯)解决方案

来源:作者:人气:-发表时间:2023-09-15 08:39:00【
HP免疫层析
1.项目背景
糖类抗原(carbohydrate antigen 19-9,CA19-9)是一种粘蛋白型的糖类蛋白肿瘤标志物,为细胞膜上的糖脂质,因由鼠单克隆抗体116NS19-9识别而命名。是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。在血清中它以唾液粘蛋白形式存在,分布于正常胎儿胰腺、胆囊、肝、肠和正常成年人胰腺、胆管上皮等处。是存在于血液循环的胃肠道肿瘤相关抗原。
《中国胰腺癌诊治指南(2021)》指出:血清 CA19-9 是目前最常用的胰腺癌诊断标记物,其诊断胰腺癌的敏感度为79%~81%,特异度为82%~90%。由于CA19-9 在胆道梗阻及感染状态下亦可异常升高,故应在黄疸缓解、炎症控制后再对其进行基线检测。血清CA19-9水平可在一定程度上反映肿瘤负荷或提示有微转移灶的可能。除诊断意义外,CA19-9还有助于评估预后及疗效。胰腺癌病人术后血清CA19-9 水平升高虽可提示复发或转移,但仍应结合影像学证据等进行综合判断。约10%的胰腺癌病人为Lewis抗原阴性血型结构,此类病人不表达CA19-9,须结合其他肿瘤标记物协助诊断。癌胚抗原诊断胰腺癌的特异度与 CA19-9 类似,但敏感度仅为44.2%。CA125升高与胰腺癌术后早期远处转移相关,一定程度上反映出肿瘤转移潜能及其相关负荷,特别对CA19-9表达阴性的胰腺癌病人,CA125具有一定的预后评估价值。其他临床常用的肿瘤标记物还有 CA50、CA242、CA724等,联合应用有助于提高诊断敏感度和特异度,但仍需高级别证据支持。
2. 性能表现(化学发光(吖啶酯)平台)
2.1 抗体配对组合:
糖链抗原CA19-9(货号:EKY0018N)包被羧基磁珠+糖类抗原CA19-9(货号:EKY0018O)标记吖啶酯;
2.2 具体指标
参考《YY/T 1178-2010 糖类抗原CA19-9定量测定试剂(盒)(化学发光免疫分析法)》
a. 最低检出限:不高于2.0U/mL
用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测,重复测定20次,得出20次测量结果的RLU值(相对发光值),计算其平均值(M)和标准差(sD),得出M+2SD,根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度一RLU值结果进行两点回归拟合得出一次方程,将M+2SD的RLU值带入上述方程中,求出对应的浓度值,即为最低检测限。
CA19-9 最低检出限
空白样本(n=20)
发光值
1
2607
2
2316
3
2371
4
2353
5
2414
6
2468
7
2299
8
2670
9
2189
10
2556
11
2221
12
2358
13
2429
14
2290
15
2304
16
2374
17
2317
18
2384
19
2285
20
2267
Mean
2374
SD
123.6
M+2SD
2621
10.6 U/mL
1
32734
2
31390
3
30977
Mean
31700
最低检出限 U/mL
0.07
b. 重复性:分别为2.9%及2.8%
用 40U/mL&#177;8U/mL和 150U/mL&#177;30U/mL的样本各重复检测10次,计算10次测量结果的平均值M和标准差SD,根据公式CV=SD/M*100%得出变异系数CV。其变异系数(CV)应不大于10%(仪器自动操作法)或不大于15%(手工操作法)。
CA19-9 重复性
序号
发光值
浓度值U/mL
发光值
浓度值U/mL
1
112817
40.73
490445
174.91
2
112570
40.64
488938
174.38
3
105906
38.24
497560
177.43
4
111795
40.36
478194
170.57
5
110967
40.06
472592
168.59
6
109292
39.46
488909
174.37
7
104306
37.66
469210
167.39
8
109133
39.40
477034
170.16
9
105000
37.91
451853
161.25
10
110520
39.90
491164
175.17
M
109230.6
39.44
480589.9
171.42
SD
3135.5
1.1
13636.1
4.8
CV
2.9%
2.9%
2.8%
2.8%
c. 线性范围:1 U/mL-1000 U/mL。
将接近线性范围上限的高值样本按一定比例稀释为至少5种浓度,其中低值浓度的样本须接近线性范围的下限。按试剂(盒)说明书进行操作,每一浓度重复检测2次,计算平均值,将结果平均值和稀释比例用最小二乘法进行直线拟合,并计算线性相关系数r。
线性范围上限不应低于参考值的5倍,下限应低于参考值的1/5(参考罗氏CA19-9参考值为27 U/mL (第95百分位数)、34 U/mL (第97.5百分位数)、39 U/mL (第99百分位数))。在生产企业所规定的线性范围内,试剂(盒)的相关系数r应≥0.99。
CA19-9 线性
线性
实测值均值U/mL
理论值U/mL
线性1
1.60
0.91
线性2
4.95
3.64
线性3
19.28
14.57
线性4
73.82
58.29
线性5
264.28
233.17
线性6
932.67
932.67
线性相关系数r
0.9994
d. 回收率:98.3%。
将浓度约为200U/mL(允许偏差为&#177;20%)的糖类抗原CA19-9样品(A)加入血清或其他相应的基质样品B中,所加入A的体积宜不超过总体积(A+B)的10%。
回收率应在(85%~115%)范围内。
序号
混合样本U/mL
低值样本U/mL
高值样本U/mL
1
37.58
23.04
174.91
2
37.04
22.11
174.38
3
37.87
22.33
177.43
均值
37.50
22.49
175.57
回收率
98.3%
3.临床相关性(化学发光(吖啶酯)平台)
西宝生物发光平台CA19-9抗体配对与Roche CA19-9试剂赋值的临床样本(高值部分)相关性R&#178;>0.95,相关性良好;低值部分(≤100 U/mL)相关性R&#178;>0.95,相关性同样较好。
4.测试方案
特别注明:
1)若客户采用吖啶酯体系,建议CA19-9抗体与吖啶酯的标记摩尔比在1:4左右;
2)若客户采用碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶体系,建议优化酶与抗体标记的摩尔比例。
待测样本:加样量20ul;
试剂1:糖类抗原CA19-9(货号:EKY0018N)-磁珠稀释物,用量50ul/测试;
试剂2:糖类抗原CA19-9(货号:EKY0018O)-吖啶酯稀释物,用量50ul/测试;
反应条件:
第一步:20ul样本+50ul试剂1混合,37℃孵育9min,清洗;
第二步:加入50ul试剂2混合,37℃孵育9min,清洗;
第三步:加入预激发液及激发液,进行测试。
测试使用发光仪器:科斯迈SMART 500S;可适用于各类吖啶酯体系的化学发光仪器(如四川迈克、深圳亚辉龙、山东康华生物、基蛋生物、南京诺尔曼等)
5.产品信息(可提供大包装试剂)
产品名称
货号
推荐配对
糖类抗原CA19-9单克隆抗体
EKY0018N
糖类抗原CA19-9(货号:EKY0018N)包被羧基磁珠+糖类抗原CA19-9(货号:EKY0018O)标记吖啶酯(抗体配对组合)
糖类抗原CA19-9单克隆抗体
EKY0018O
糖类抗原CA19-9抗体(货号:eky 0018N)-羧基磁珠浓缩液
DKY1318A
 
糖类抗原CA19-9抗体(货号:EKY0018O)-吖啶酯浓缩液
DKY1318B
 
羧基磁珠(超顺磁),1um
DEG0091B-1-100mg
 
羧基磁珠(超顺磁),3um
DEG0091A-3-100mg
 

 

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