岛津蛋白测序仪专用试剂/色谱柱

来源：作者：人气：-发表时间：2020-03-11 10:52:00【大中小】

岛津公司的蛋白质测序仪（Protein Sequencer）PPSQ以Edman降解法为基础，将蛋白质从N-末端顺次切断进行序列分析。此方法具有直接测定、可靠性高的优势。PPSQ 51A/53A开发了单克隆抗体药、重组蛋白药的N-末端氨基酸序列分析方法，另外，也开发了具有特殊结构的生物药N-末端氨基酸序列分析方法。

N-末端氨基酸序列分析是很多已上市生物药的年检项目，并在开发和质量控制方面起着至关重要的角色。高灵敏度、适用于基因克隆探针引物常规氨基酸序列测定的蛋白序列仪的市场占有量日益扩大，岛津与Fujifilm-Wako联合开发的仪器配套试剂/色谱柱可助力蛋白组学研究。

西宝生物作为Wako指定国内代理商,提供岛津蛋白测序仪PPSQ配套用wako品牌试剂和耗材，进口品质，产品齐全，货期稳定。

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埃德曼降解法

埃德曼降解法（Edman degradation method）是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）首先创立，用于肽链或蛋白质N-末端氨基酸序列分析的常用方法，其原理很简单，在碱性条件下反应，用异硫氰酸苯酯（Phenyl isothiocyanate, PITC）与待检测的蛋白质（多肽）的N-末端氨基生成苯氨基硫甲酰（PTC）的衍生物，然后处理-关环-选择性切断肽链N-端，得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂萃取衍生物，在酸的作用下，不稳定的生物转变为稳定的的乙内苯酰硫脲（PTH）衍生物，余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的乙内酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸），可以鉴定出氨基酸类别。重复氨基酸鉴定反应以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质（多肽），还可以将样品先切成小的肽段，先对肽段序列分析，再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。

背景

岛津公司的蛋白质测序仪（Protein Sequencer）PPSQ以Edman降解法为基础，将蛋白质从N-末端顺次切断进行序列分析。此方法具有直接测定、可靠性高的优势。近期，岛津推出新型的蛋白质测序仪PPSQ 51A/53，配备SPD-M30A高灵敏度检测器、软件满足FDA 21 CFR Part 11数据完整性的要求。PPSQ 51A/53梯度系统更是在等度系统基础上，提高检测灵敏度，适合微量样品的氨基酸序列分析。应用岛津PPSQ 51A/53A开发了单克隆抗体药、重组蛋白药的N-末端氨基酸序列分析方法，另外，也开发了具有特殊结构的生物药N-末端氨基酸序列分析方法，如甲硫氨酸缺失、焦谷氨酸环化封闭等样品。

目前，在制药领域，生物药得到越来越多的关注。生物药是利用DNA重组、细胞融合、细胞培养等生物技术开发出的蛋白质药物、抗体药物等。几乎所有蛋白质合成都起始于N-末端，其序列组成对于蛋白质整体的生物学功能有着重要的影响力，因此蛋白质的序列分析对于生物药效果很关键。不仅在研发中，而且在质量控制中都很重要。

2015版《中国药典》三部人用重组DNA技术产品总论对生物药的生产及质量控制方面，，针对其蛋白质结构提出技术要求，应测定目标产品的氨基酸序列，并与其基因序列推断的理论氨基酸序列进行比较。因此，N-末端氨基酸序列分析是很多已上市生物药的年检项目，如重组人促红素注射液（CHO细胞）、重组人粒细胞刺激因子注射液等。此外，国际法规中也有对于生物药N-末端氨基酸序列测定的要求。药品注册的国际协调组织颁布的指导法规ICH-Q6B规定，生物药进行申报时，必须提供N-末端氨基酸序列信息。《欧洲药典》中规定，生物仿制药申报也必须提供N-末端序列信息。

PTH氨基酸的梯度分离案列

在PPSQ系统（Edman降解法）分析柱中加入50ul的样本溶液，为了进行梯度洗脱而不改变该点，使用了一个半微柱。流动相A为乙酸盐缓冲液、乙腈，流动相B为乙酸盐缓冲液、甲醇、2-丙醇。

图4（a）表示通过梯度洗脱2pmol的PTH-氨基酸标准混合物而获得的色谱图

图4（b）表示通过等度洗脱而获得的色谱图。

尽管PTH氨基酸的洗脱顺序略有不同，但检测到通过梯度洗脱获得的PTH氨基酸的峰高比等度洗脱高约3至5倍。

蛋白质测序仪比较一个循环和上一个循环之间PTH氨基酸峰的增加和减少，并鉴定出特异性检测的PTH氨基酸。

图1 PTH-氨基酸标准混合物（2 pmol）的分析
（A）梯度系统，（b）等度系统

在等度洗脱中，由于流动相的组成恒定，因此洗脱时间较晚的疏水性氨基酸的峰高较低。另一方面，梯度洗脱可改善高疏水性PTH氨基酸的分离，因为具有高洗脱能力的流动相B的浓度会随时间增加（图1a）。

梯度洗脱还可以分离和检测500 fmol的PTH氨基酸（图2），即使使用蛋白质测序仪分析小样品，也可以轻松检测特异增加的PTH氨基酸。

图2 分析PTH-氨基酸标准混合物（500 fmol）

Wako品牌蛋白测序仪配套用试剂/色谱柱

蛋白内切酶

产品编号	产品名称	中文名称	包装	用途
125-05061	Lysyl Endopeptidase, Mass Spectrometry Grade	赖氨酰肽链内切酶，质谱等级	20 ug×5	用于蛋白质研究
202-15951	Trypsin, from Porcine Pancreas, Mass Spectrometry Grade	胰蛋白酶，从猪胰脏中，质谱等级	20 μg×5	用于蛋白质研究
050-05941	Endoproteinase Glu-C, Sequencing Grade	测序级谷氨酰蛋白内切酶Glu-C	50ug	用于蛋白质研究
056-05921	Endoproteinase Asp-N, Sequencing Grade	测序级天冬氨酰蛋白内切酶Asp-N	2ug	用于蛋白质研究

色谱柱

产品编号	产品名称	中文名称	包装	用途
235-63951	WakopakWakosil-PTH-II 4.6×250mm(S-PSQ)	氨基酸硅胶柱PTH-II色谱柱	1 Column	专用柱

试剂耗材

产品编号	产品名称	中文名称	包装	用途
200-20021	12% Trimethylamine Solution	12%三甲胺溶液【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
207-10761
207-20031	Trifluoroacetic Acid	三氟乙酸【危】	40 mL	用于岛津蛋白肽测序
204-10771
018-26041	37% Acetonitrile Solution	37%的乙腈溶液【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
014-13831
033-24371	1-Chlorobutane	1-氯丁烷【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
021-09851
052-09041	Ethyl Acetate	乙酸乙酯【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
054-04981
084-05501	Heptane	庚烷【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
014-12471	Acetonitrile	乙腈【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
165-27361	PTH-amino Acids Mixture Standard	PTH-氨基酸混合标准品【危】	2 mL用×4	用于岛津蛋白肽测序
163-12271
168-27351	PTH-amino Acids Mobile Phase	PTH-氨基酸流动相【危】	1 L	用于岛津蛋白肽测序
161-14271
161-27341	5% Phenyl Isothiocyanate, n-Heptane Solution	5%异硫氰酸苯酯，正庚烷溶液【危】	40 mL	用于岛津蛋白肽测序
168-14161
204-20041	25% Trifluoroacetic Acid Solution	25%三氟乙酸溶液【危】	40 mL	用于岛津蛋白肽测序
203-12201
072-06461	Glass Fiber Disk, TFA Treated	玻璃纤维盘，TFA处理	50 Plates	用于岛津蛋白肽测序
073-04171
132-18821	30%N-Methylpiperidine Solution(for Gradient Elution)	30% N-甲基哌啶溶液（用于梯度洗脱）【危】	200 mL	用于岛津蛋白肽测序
202-20721	25% Trifluoroacetic Acid Solution (for Gradient Elution)	25% 三氟乙酸溶液（用于梯度洗脱）【危】	40 mL	用于岛津蛋白肽测序
236-63981	Wakopak^® Wakosil PTH-GR (S-PSQ)(for Gradient Elution)	Wakopak^®Wakosil PTH-GR (S-PSQ)（用于梯度洗脱）	1 EA	用于岛津蛋白肽测序
163-28261	PTH-amino Acids Mobile Phase A (for Gradient Elution)	PTH-氨基酸流动相 A（用于梯度洗脱）【危】	1 L	用于岛津蛋白肽测序
160-28271	PTH-amino Acids Mobile Phase B (for Gradient Elution)	PTH-氨基酸流动相 B（用于梯度洗脱）【危】	1 L	用于岛津蛋白肽测序

染色

产品编号	产品名称	中文名称	包装	用途
293-57701	Negative Gel Stain MS Kit	负凝胶染色MS试剂盒	20 tests	用于电泳
299-58901	Silver Stain MS Kit	银染剂MS试剂盒	20 tests	用于电泳