凝胶过滤介质——层析介质优选西宝生物

来源：作者：人气：-发表时间：2015-10-16 10:29:00【大中小】

凝胶过滤技术在酶、蛋白质、多肽、核酸等生物大分子的分离纯化中起重要的作用，在各种柱层析的分离中是较温和的处理方法。凝胶过滤分离的原理不是通过分离介质与目的物分子间功能基的相互作用，而是根据被分离物的分子大小进行分离，因此又称为体积排阻色谱或分子筛层析等。生物分子比盐的分子量大很多，使用凝胶过滤介质进行脱盐操作，十分方便、可靠。

西宝生物凝胶过滤介质（GM1250、GM1225）是以魔芋葡甘聚糖为基质的新型凝胶过滤层析介质，为经过交联的珠状凝胶。这是一类无功能基团的惰性物质，不与溶质分子发生作用，分离条件温和，并可在相当广的温度范围内进行操作，因此不稳定的分子尤其是那些对pH值、金属离子浓度敏感的、对环境要求苛刻的生物分子均适用此介质。为满足蛋白质的特殊要求，可以在多种条件下，如高离子强度、低离子强度、以及脲、盐酸胍存在的环境下进行分离纯化。

该类凝胶不但可用于生物制品的脱盐和分离纯化，也适用于大规模生物制品的分离过程。GM凝胶过滤层析介质由于交联程度不同，具有不同的分离范围，可以根据实际需要选择。魔芋葡甘聚糖微球具有优良的生物相容性，同时具有蛋白回收率及分辨率高等优点。

一、技术指标

技术参数	GM1250	GM1225
骨架结构	交联魔芋葡甘聚糖
外观	透明珠状体
粒径（μm）	100～160 (湿态) d₅₀
蛋白分离范围（Da）	10³～10⁴	4×10³～3×10⁴
pH 稳定范围	2～13
原位清洗pH	2～13

二、产品特性

1. 优良的物理化学稳定性，较长的使用寿命

具有优良的物理化学稳定性。介质在常规溶液包括水、盐溶液、有机溶剂、碱及弱酸溶剂中均较稳定，可在6 M盐酸胍、8 M尿素、1 M NaOH溶液及0.1 M的盐酸中经一周浸泡性能无明显变化。不适宜在强酸条件下工作，通常只能接触强酸的稀溶液。在较稀溶液中可以长期接触，如在0.02 mol/L盐酸中经6个月后，仍无明显变化。

pH中性的湿态珠体可经受120℃、30分钟高压灭菌，不会影响层析性能。GM凝胶过滤介质可承受一定的压力。

2. 较高的选择性和分辨率

介质在高流速下仍保持高分辨率及选择性。

3. 较低的反压

介质颗粒大小分布均匀，在高流速下能保持低反压，发挥高动力载量和高分辨率的特点。

4. 高重复性易于放大

先进的制备技术及严密的质量保障体系，使凝胶性能具有高重现性，加之该凝胶易于装柱，更利于实验室及生产规模的工艺放大。

5. 蛋白质的高回收率

介质非特殊吸附性极低，可确保生物制品的高回收率。

6. 使用方便

介质提供溶胀湿态产品，使用前不需进行溶胀，可即买即装柱，便于使用。

三、使用注意事项

装柱：凝胶过滤层析具有设备简单，易于操作等优点，但装柱是影响分离效果的重要步骤，必须有分布均匀的柱体结构，不能产生分层现象，不能存在“纹路”或气泡。只有良好的装柱才能保证层析正常工作。
柱的重复使用及保存：西宝生物凝胶过滤介质不会与被分离物质发生作用，因而在层析分离后，只要稍加平衡就能进行下一周期的工作，不必经过特殊处理，即可反复使用，连续使用不影响分离效果。
在凝胶使用多次后，会有一些杂质污染凝胶或层析床的表面，此时要做适当的处理，去除这些“污染物”。当层析介质颜色发生明显变化，甚至层析柱表面出现沉淀物，使表面有明显的板结时，要对层析柱进行净化处理，可使用温水或缓冲液进行洗涤，也可使用0.2 mol/L的NaOH和 0.5 mol/L NaCl的混合溶液进行原位清洗，通常可以洗掉一些污染物。以恢复层析柱的功能。经常使用的层析柱以湿态保存为好。
上样：凝胶介质在进行脱盐及蛋白分离过程，要选取适当的上样量可得到优良的分离纯化效果，上样量为柱体积的5～10%，脱盐操作上样量可高达柱床体积的30%左右。
操作流速：凝胶介质可承受一定压力，可在常压及0.1MPa条件下工作，（以1500px*2.6 cm I.D.，CV=300 mL的脱盐柱为例）推荐较佳流速为3-5mL/min（脱盐操作）或1-2 mL/min（凝胶过滤操作）。

四、预装柱使用方法及注意事项

对于尺寸为1500px*2.6 cm I.D.，CV=300 mL的脱盐预装柱（GM1250），建议采用如下的操作步骤进行操作。

（1）平衡：采用3-5mL/min（脱盐操作）或1-2 mL/min（凝胶过滤操作）的流速（后续操作也采用相同流速）平衡柱子1.5-2.0 CV。

（2）上样：脱盐操作可上样30-60 mL（具体体积可根据实际脱盐效果调整，与蛋白分子量和盐浓度相关），凝胶过滤分离蛋白时上样体积控制在15 mL左右。

（3）洗脱：继续用缓冲液洗脱，收集蛋白峰。

（4）保存：用纯水冲洗1 CV后，用20%乙醇冲洗1.5CV，然后将预装柱进、出口密封好，室温保存。

注意事项：

（1）流动方向：按照柱子的方向（适配器所在的柱子上方为流动相入口方向）操作；

（2）流速（压力）：在推荐流速和压力（小于0.1 MPa）下使用，防止柱床压塌、变形影响柱效；

（3）防止流动相走干导致柱子进气泡；

（4）保存在20%乙醇（室温）防止介质长菌。

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