蛋白质生产培养工序中氨基酸的监测

来源：作者：人气：-发表时间：2016-01-20 14:31:00【大中小】

在蛋白质生产培养的工序中，培养液中的氨基酸是重要的营养源，对在不同溶氧量、PH值、温度下培养液中的各种氨基酸浓度进行监测和控制至关重要。日立氨基酸分析仪(Hitachi)能够进行多成分同步分析的定量精度氨基酸，以其高分离度而著称，在国内应用较为普遍。西宝生物提供全自动氨基酸分析仪相配套的耗材、缓冲液和显色剂等相关试剂，欢迎致电400-021-8158。

■ 生物药品的研发流程

(※)实施培养液氨基酸监测的工序

■ 氨基酸监测的样品和色谱条件

＜生理体液分析法色谱条件＞

L-8900全自动氨基酸分析仪

色谱柱	855-4506 4.6mmI.D.×60mm	柱温	32～70℃
保护柱	855-3643 4.0mmI.D.×5mm	反应液流速	0.3mL/min
脱氨柱	855-3523 4.6mmI.D.×40mm	反应温度	135℃
流动相	605-07471 PF Buffer Kit	检测波长	VIS 570nm、440nm
反应液	299-70501 Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI	进样量	20μL
反应液	299-70501 Ninhydrin coloring solution kit for HITACHI	流速	0.35mL/min

＜样品＞

＜预处理＞


细胞	CHO细胞(CRL-9606)
培养槽	1L
通风	仅液面通风(Air、O2、N2、CO2的混合气体)
培养基	Ham's F12 + 10% FBS

培养液与浓度5%的三氯乙酸溶液以1:1混合
↓
离心分离	10,000rpm,10min
↓
过滤	Pore Size 0.2μm
↓
分析用样品

在以下条件的培养过程中，定时采样，进行了分析。

	培养不足1日	培养1日后
培养条件A	标准溶氧浓度	标准溶氧浓度
培养条件B	标准溶氧浓度	低溶氧浓度

■ 培养液中的氨基酸测定例

基于生理体液分析法的氨基酸标准样品测定例(2nmol/20μL)

(但部分氨基酸为1nmol/20μL～40nmol/20μL)

培养液中的氨基酸测定例

■ 不同培养条件下氨基酸随时间的变化

* 标准样品的测定中，此次介绍的氨基酸中，Thr、Gly、Ala的峰保留时间的重现性为RSD=0.05～0.07%，峰面积的重现性为RSD=0.15～0.19%，得以确认茚三酮柱后衍生法的高度重现性。(均为n=3)(产品规格如下。峰保留时间的重现性：0.5%以内(Ala)、0.3%以内(Arg)；峰面积的重现性：1.5%以内(Gly、His)

* 通过监测培养液中各种氨基酸的浓度，可获知培养过程中各成分的盈缺，因此有助于探讨最佳培养液组成。另外，基于培养条件的不同，可见氨基酸含量的变化出现差异的成分。可以认为这反映出细胞内的处理过程已发生变化，产生的蛋白质也可能不同，因此培养液中氨基酸的同步监测可作为抗体药物生产领域中生产管理的有效指标之一。

注意：本资料所示数据仅为测定例用数据而非可保证仪器性能的数据。仪器只是研究用仪器，而不是诊断、治疗或预防人或动物疾病的医疗仪器。

■ 参考文章

1.日立氨基酸分析仪配套试剂解决方案

2.我国食品行业氨基酸的测定方法简介