Ludger唾液酸-- NeuAc（唾液酸）和NeuGc（神经氨酸）的定量分析

来源：作者：人气：-发表时间：2018-10-25 13:30:00【大中小】

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众所周知，唾液酸是糖链的重要组成成分，是维持EPO体内生物效应所必需的。唾液酸含量影响净负电荷从而改善了糖蛋白药物(如促红细胞生成素EPO)的代谢动力学,糖基化对稳定EPO的体内活性具有重要作用，若缺乏糖链，则EPO在体内迅速被水解而失活.

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NeuAc（唾液酸）和NeuGc（神经氨酸）的定量分析是监管机构在生物制药表征的产品标准规格指南中提出的一个要求。特别是，人类和非人类的唾液酸 (NeuAc / NANA和NeuGc / NGNA分别)相对水平测定是很重要的，因为有些病人有高水平的抗神经氨酸（anti-NeuGc）抗体，这可导致中和反应和快速清除含有神经氨酸（NeuGc）的生物药品 (Nguyen等,2005)。由于唾液酸（NeuAc）和神经氨酸（NeuGc）在分析糖蛋白中具有重要意义，它通常被认为是生物治疗药物的关键质量属性(CQA)。
较广泛的唾液酸（NeuAc）和神经氨酸（NeuGc）比例确定方法是如下：

• 通过轻度酸水解放糖蛋白上的唾液酸残基。

• 用1-1,2 - 二氨基-4,5 - 亚甲基苯酚（DMB）荧光标记释放的唾液酸。

• 通过高效液相色谱法（HPLC）或超高效液相色谱法（UHPLC）对DMB标记的唾液酸进行相对定量分析。

Ludger的DMB标记试剂盒（货号：LT-KDMB-A1），提供从糖蛋白释放唾液酸并用DMB标记的所有功能。该试剂盒包含可以检测高达22个糖蛋白样品（每样品含50-100 μg糖蛋白）的试剂和材料。每个标记可标记每个样品中大约10 pmol到2.5 nmol的唾液酸。

试剂盒中包含一系列唾液酸的参考标准品(含Neu5Ac，Neu5Gc，Neu5，7Ac2，Neu5，Gc9Ac，Neu5，9Ac2，Neu 5,7,(8)，9Ac3Gc)，以及NeuAc和NeuGc的定量标准品。这三个标准品可以随着释放的唾液酸样品进行DMB标记。

系列稀释液制备后的NeuAc和NeuGc定量标准品可用于定量分析。LudgerTag™DMB试剂盒中有提供关于如何制备的说明。如有需要NeuAc和NeuGc定量标准品也可在另行购买，请跟我们联系。

作为阳性对照，我们建议使用包含NeuAc和NeuGc唾液酸的胎球糖蛋白，我们同样建议使用最纯化的LudgerBioQuant^TM糖肽标准品来作为阳性对照。这个糖肽标准品（货号: BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一个复杂的N-连接双触角聚糖，终止于两个N-乙酰神经氨酸。

使用此标准品可以检查聚糖释放、标记和回收的有效性，并可增强您的唾液酸测量准确性。Ludger还销售可用于识别Neu5，9Ac2的标准品。水可以作阴性对照。

图1：由LS-UR2 UHPLC色谱柱（货号LS-UR2-2.1x100）分析出来的DMB-标记唾液酸对照品。

为了检测聚糖的分离该对照品也可以作为跑样之前的系统适用性标准品。

唾液酸分析相关产品		咨询/订购热线：400-021-8158
商品型号	英文品名	中文品名	包装
LT-KDMB-A1	DMB Sialic Acid Labeling Kit	DMB 唾液酸释放标记试剂盒	1Reaction Set
LS-R1-4.6x150	Ludger Sep R1 HPLC Column	R1 HPLC 色谱柱-唾液酸	4.6 x150 mm
LS-UR2-2.1x100	Ludger Sep UR2 UHPLC Column–sialic acids	UR2 UHPLC 色谱柱-唾液酸	2.1 x 100 mm
CM-NEU-AC-01	N-acetylneuraminic acid quantitative standard	N-乙酰神经氨酸定量标准品	1 nmol
CM-NEU-GC-01	N-glycolyneuraminic acid quantitative standard	N-羟乙酰神经氨酸定量标准品	1 nmol
CM-NEU5,9,AC-01	N-acetylneuraminic acid qualitative standard	N-乙酰神经氨酸定性标准品	1 nmol
BQ-GPEP-A2G2S2	A2G2S2 glycopeptide standard	A2G2S2 糖肽标准品（用于唾液酸释放和标记过程）	10 μg
GCP-FET-50U-X4	Fetuin Glycoprotein (4 x 50 ug)	胎球糖蛋白（4×50微克）（唾液酸化阳性对照）	4 x 50 μg

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1、拥有强大的研发技术团队
西宝生物技术力量雄厚，研发技术成熟，技术人员均为领域内技术人才，并与国内著名大学、研发机构合作。
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