胰蛋白酶在生物技术产业中的应用全景图

来源：作者：人气：-发表时间：2026-01-21 10:56:00【大中小】

胰蛋白酶（Trypsin）作为一类具有高度底物特异性的丝氨酸蛋白酶，被誉为生命科学基础研究及生物医药产业中的“基石工具酶”。其独特的催化机制使其能够精准识别并切割多肽链中精氨酸（Arg）和赖氨酸（Lys）残基羧基端的肽键，这种高效且特异的酶切能力使其应用极为广泛。在生物制药工业中，胰蛋白酶更是不可或缺的工艺酶，深度参与抗体的质量控制（如肽图分析）、重组蛋白疫苗的制备、以及细胞治疗产品（如CAR-T）的生产流程。在基础科研领域，胰蛋白酶不仅是蛋白质组学中“自下而上”策略的核心酶，用于将复杂蛋白样品酶解为适合质谱分析的多肽片段，还广泛应用于细胞培养中的细胞传代与消化。

西宝生物作为生命科学试剂与技术服务供应商，依托其成熟的酶工程与蛋白质技术平台，在胰蛋白酶产品的研发与应用方面构建了核心竞争力。该平台聚焦于高纯度、高活性及高稳定性的胰蛋白酶制备工艺，通过基因工程重组技术、先进的层析纯化体系以及严格的质量控制标准，成功推出了系列化的胰蛋白酶产品。

一、产品核心特性

产品为毕赤酵母表达的重组猪胰蛋白酶，在符合 GMP 法规的环境下生产，来源于微生物，不含动物源成分，无动物源性病毒污染（如猪流感病毒、猪细小病毒等），天然缺乏糜蛋白酶活性，其活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂（如 PMSF 和 TLCK 等）的抑制。

二、多元应用场景：赋能生物科技全产业链

胰蛋白酶凭借 “精准酶切” 与 “温和操控” 的双重特性，能够完美适配不同应用场景的严苛需求。

2.1 生物制药生产：保障高效与合规的核心工具

在抗体药物（mAbs）生产领域，该酶在 CHO、HEK293 等贴壁细胞的收获环节表现卓越。它能温和解离细胞，显著提升细胞回收率，同时最大程度降低对细胞的损伤，保持产物活性。此外，作为蛋白酶切工具，它可用于去除融合标签，且其活性可被苯甲脒完全抑制，这一特性极大地方便了下游纯化控制，确保 SEC-HPLC 分析无杂蛋白干扰。

在疫苗生产中，该酶适用于流感疫苗、HPV 疫苗及腺病毒载体疫苗等的细胞消化流程。其无动物源成分的特性符合疫苗生产的严格法规要求。应用案例显示，使用重组胰蛋白酶后，细胞活率可保持在 95% 以上，病毒滴度的批次间一致性提升约 15%，为工艺放大提供了有力支持。

在蛋白药物质量控制与胰岛素生产方面，该酶在肽图分析中通过特异性水解产生清晰且可重复的肽段图谱，是药物身份鉴别和杂质分析的关键工具。在门冬胰岛素、甘精胰岛素等类似物的工业化生产中，它能精准切割前体蛋白为活性胰岛素分子，从而保证产品的结构完整性与生物活性。

2.2 细胞治疗与再生医学：维持细胞活性的关键原料

针对间充质干细胞、诱导多能干细胞及 CAR-T 前体细胞等敏感细胞的解离与传代，重组胰蛋白酶展现出独特优势。其低内毒素和高特异性切割能力，能够有效减少细胞膜损伤，维持细胞高存活率（经流式验证 >95%）及多能性标志物的表达。某 CAR-T 企业的应用案例表明，使用该产品后，细胞回收率提升了 12%，工艺放大失败率降至 2% 以下。相比传统胶原酶，它不仅缩短了 50% 的消化时间，且无血清配方的兼容性使其能完美适配多种培养体系。

2.3 生命科学研究与创新应用

在细胞生物学研究中，该酶已成为实验室贴壁细胞传代的 “金标准”。其高纯度特性降低了细胞毒性，支持原代细胞、神经元等娇贵细胞的长期培养，并有效延长了消化操作的安全窗口。

在生物材料与组织工程领域，该酶用于胶原蛋白、明胶等生物材料的酶法提取。它能精准去除端肽以降低免疫原性，同时保留关键的三螺旋结构，从而优化材料的安全性与理化稳定性。此外，它还广泛应用于类器官培养中的基质降解，以及智能水凝胶的开发等前沿创新场景。

三、实验方案：适配核心应用场景

3.1 贴壁细胞消化（CHO 细胞 / 干细胞收获）

准备工作需要将胰蛋白酶冻干粉用无钙镁 PBS 溶解，配制终浓度为 0.025%-0.25%（重组产品推荐 0.05%-0.25%）的工作液，并可根据需要加入 0.02% EDTA，随后将工作液预热至 37°C。

样本处理阶段应先弃去细胞培养瓶或反应器中的上清液，再用无钙镁 PBS 轻轻清洗细胞层，以去除可能抑制酶活性的残留血清。

消化孵育时加入适量工作液，轻轻摇晃使酶液均匀覆盖所有细胞表面，随后在 37°C 条件下孵育 2-5 分钟，并在期间通过显微镜观察细胞状态。

在观察到细胞变圆并开始脱落后立即进行，需加入含血清的培养基或大豆胰蛋白酶抑制剂终止反应，再轻柔吹打制成单细胞悬液，最后以 1200 rpm 离心 5 分钟（或 1000 rpm 离心 5 分钟）收集细胞，用于后续传代或工艺步骤。

3.2 蛋白质酶解（质谱分析前处理）

复溶储存时，需使用 50mM 乙酸将冻干粉配制成 1mg/mL 的储存液，建议分装后置于 -20°C 保存，以避免反复冻融导致酶活下降。

底物准备阶段，应将还原烷基化后的蛋白质溶解于 50mM NH?HCO?缓冲液（pH≈8.0）中，并将浓度调整为 1mg/mL 备用。

酶切反应可按酶：底物 = 1:50（质量比）的比例加入胰蛋白酶工作液，随后在 37°C 条件下孵育 4-16 小时。

终止与检测步骤中，可加入甲酸至终浓度 0.1%-1% 以终止反应，水解产物经脱盐处理后即可进行 LC-MS/MS 分析。

四、验证实验

图例解释:正常培养的HEK293细胞，分别用胰蛋白酶消化（货号DCE0060R），从左到右浓度为0.025m/mL、0.05mg/mL，37℃消化270s。观察细胞消化状态。

图例解释：细胞密度:6.78 X 105 Cells/ml，存活率:93.83%。（验证货号：DCE0060S）

西宝提供胰蛋白酶列表

品牌	货号	产品名称	浓度	规格
Seebio	DCE0060S	重组胰蛋白酶 LS(细胞消化用）	0.025mg/ml	40ml
Seebio	DCE0060T	重组胰蛋白酶（质谱级）冻干/非冻干		100ug
Seebio	DCE0060P	胰蛋白酶（牛胰） 1：2500	精制级，1：2500， ≥2500 USP U/mg	5g
Seebio	DCE0060O	胰蛋白酶（猪胰）1：250	BR，1:250	5g/ 50g
Seebio	DCE0060N	胰蛋白酶（猪胰）1：2500	≥2500U/mg	5g
Seebio	DCE0060C	胰蛋白酶 1:300		10g
Seebio	DCE0060A	胰蛋白酶 1:250	250U/mg	50g/250g