FITC标记赖氨酸葡聚糖

来源：作者：人气：-发表时间：2020-05-25 14:33:00【大中小】

FITC标记赖氨酸葡聚糖

FITC标记赖氨酸葡聚糖是一类多糖衍生物，既带游离伯胺和羧酸，也带有荧光染料荧光素（FTIC）。赖氨酸是一种天然存在的氨基酸，在生物化学和生命科学领域广泛用于结合和固定。

FITC标记赖氨酸葡聚糖也被称为Fluoro-emerald®或fluoroemerald ®。经纯化后，所有批次都需检测分子量，取代度，干燥失重和游离FITC。FITC标记赖氨酸葡聚糖为黄色至橙色粉末，分子量范围从4 kDa到500 kDa。

荧光素(FITC)是一种荧光明亮的染料，广为使用，在493nm吸收。在520nm处发光。高质量的FITC标记赖氨酸葡聚糖具备:

优异的分子量分布（多分散性低）
明亮的荧光
可用于细胞和组织的固定
易与染料或生物分子结合
完全水溶性，在溶液或保质期内具有稳定性佳

结构

FITC标记赖氨酸葡聚糖由来源于肠系膜明串珠菌的特征鲜明的葡聚糖组分合成。葡聚糖先用赖氨酸标记，然后在温和条件下使用FITC功能化，形成FITC标记赖氨酸葡聚糖。赖氨酸的取代度在0.005-0.03 (mol赖氨酸/mol葡萄糖)，而FITC的取代度为0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。

图 1. FITC标记赖氨酸葡聚糖的结构式。赖氨酸主要和葡聚糖在赖氨酸的ε-还是α-氨基位置结合未明确。

赖氨酸葡聚糖 (or Dextran-lysine-fixable) 是由来自肠系膜白串珠菌的葡聚糖的特定片段通过赖氨酸标记而合成的。然后用FITC在温和条件下功能化得到FITC标记赖氨酸葡聚糖。经纯化，控制产品的分子量，外观，溶解度，取代度，pH，游离赖氨酸和游离FITC。产品的分子量是由对应的葡聚糖片段的相近分子量来确定的。例如，FITC标记赖氨酸葡聚糖4的分子量大约为4000 Da。实际分子量是通过GPC测定的。葡聚糖来源于肠系膜白串珠菌B-512F,由α-D-(1-6)线性葡聚糖组成， α-(1-3) 侧链含量较低（2-5%）。葡聚糖的分子量范围从4000 到500000，并且通过GPC，比旋，吸光率和其它参数严格控制质量。

物理性质

FITC标记赖氨酸葡聚糖是黄色至橙色粉末，极易溶于水或电解质溶液中。FITC标记赖氨酸葡聚糖不溶于大多数有机溶剂，例如乙醇，甲醇，丙酮，氯仿，乙酸乙酯等。赖氨酸的取代度为0.005-0.03(mol赖氨酸/mol葡萄糖)。FITC的取代度是 0.001-0.01 (mol FITC/mol 葡萄糖)。荧光素/FITC的最大激发波长为493 nm，最大发射波长为 520nm (图2)。

图2. FITC标记赖氨酸葡聚糖70在 pH 7.4 PBS溶液中(10 mg in 50 mL)的荧光图谱。激发/发射波长493/516 nm。

储存和稳定性

FITC标记赖氨酸葡聚糖的稳定性研究之前未见诸报道。不过，但根据葡聚糖的性质和赖氨酸与葡聚糖链的碳酰二胺化学键判断，该物质具有较好的稳定性。FITC和赖氨酸之间的硫脲键是稳定的。若容器密封完好，室温干燥条件下，FITC标记赖氨酸葡聚糖可以稳定保持6年。

应用

携带氨基的葡聚糖，作为生物结合和活体固定的工具（1,2），对于科学界而言价值非凡。赖氨酸结构中的游离氨基可以与激活的基团以共价键结合，例如NHS酯或异氰酸酯，或者，与羧酸通过常规的肽偶联剂偶联，例如DCC，HOBt 以及HATU。细胞和组织固定，使组分保持“类活体态”，并保持细胞渗透性，允许抗体可以进入细胞结构内，应用举例，用于显微研究和免疫转染。赖氨酸结合葡聚糖通过与固定剂反应（本文使用的是甲醛或戊二醛），与类似蛋白质和脂质体的生物大分子形成共价交联，使整个体系和葡聚糖固定。这个在分子成像定性或定量评估生物事件时，具有十分独特的重要意义。如果没有固定，在活体系统内的这些结构将迅速分散和分解。荧光素/FITC最大激发波长为493 nm，最大发射波长为 520nm 。

产品列表

产品编号	品名	分子量(kDa)	包装
FLD4-10mg	FITC-lysine-dextran 4	4	10 mg
FLD4-5mg	FITC-lysine-dextran 4	4	5 mg
FLD10-10mg	FITC-lysine-dextran 10	10	10 mg
FLD10-50mg	FITC-lysine-dextran 10	10	50 mg
FLD70-10mg	FITC-lysine-dextran 70	70	10 mg
FLD70-50mg	FITC-lysine-dextran 70	70	50 mg
FLD500-10mg	FITC-lysine-dextran 500	500	10 mg
FLD500-50mg	FITC-lysine-dextran 500	500	50 mg

参考文献

1. (a) Henley JR, Krueger EW, Oswald BJ, McNiven MA, J Cell Biol (1998) 141:85-99;
2. (b) Fritzsch B, Christensen MA, Nichols DH; J Neurobiol. 1993 Nov; 24(11):1481-99;
3. (c) Fritzsch B., J Neurosci Methods (1993) 50:95-103.
4. Schmued, L., Kyriakidis, K., Heimer, L., Brain Res., 526, (1990) 127-134

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